BDNF對急性高眼壓后視網(wǎng)膜保護作用機制的研究.pdf

1、第一部分大鼠急性高眼壓模型的改良 目的：觀察急性高眼壓誘導(dǎo)的不同缺血/再灌條件下內(nèi)層視網(wǎng)膜形態(tài)與功能的變化，以探討最佳的模型制備條件。 方法：成年SD大鼠，根據(jù)不同加壓與再灌時間分組。左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓(102.4mmHg±9.2mmHg)并維持缺血30、45、60或90分鐘，右眼設(shè)為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天復(fù)測b波，尼氏染色檢測節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞密度、內(nèi)層視網(wǎng)膜厚度。

2、 結(jié)論：閃光視網(wǎng)膜電圖b波作為大鼠急性高眼壓動物模型制備的客觀標(biāo)準(zhǔn)更加可靠。高眼壓維持的時間與再灌的時間將嚴(yán)重影響內(nèi)層視網(wǎng)膜細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，高眼壓維持60分鐘可能是引起內(nèi)層視網(wǎng)膜不可逆性損傷的臨界時間點。 第二部分BDNF對急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜谷氨酸代謝循環(huán)的影響 目的：檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)預(yù)處理急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜谷氨酰胺合成酶(GS)和谷氨酸轉(zhuǎn)運體(GLAST、GLT-1)表達的變化，從影響谷

3、氨酸代謝循環(huán)途徑的角度探討B(tài)DNF保護節(jié)細(xì)胞(RGCs)的可能機制，為視網(wǎng)膜保護提供新的思路。 方法：正常成年SD大鼠分為單純高眼壓(HIOP)模型組、溶媒對照組和BDNF預(yù)處理組。溶媒對照組和BDNF預(yù)處理組大鼠左眼玻璃體內(nèi)注射溶媒或BDNF。2天后三組動物左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓(102.4mmHg±9.2mmHg)且維持缺血60分鐘，右眼設(shè)為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天后通過免疫組織

4、化學(xué)法檢測大鼠視網(wǎng)膜GS、GLAST、GLT-1的表達變化；用Westernblot對GS表達的變化進行檢測。 結(jié)論：在缺血再灌早期，內(nèi)層視網(wǎng)膜神經(jīng)元主要通過上調(diào)GLAST、GS和GLT-1有效地重新攝取細(xì)胞間隙中過量的Glu并將其轉(zhuǎn)換為無毒的Gln，對視網(wǎng)膜神經(jīng)元尤其是節(jié)細(xì)胞起到保護作用。提前給予BDNF后GLT-1的表達高峰由損傷后第3天提前至第1天，即在再灌早期(1小時-1天內(nèi))有效提高GLT-1對Glu的重攝取能

5、力，減輕Glu對突觸后神經(jīng)元的毒性。 第三部分BDNF對急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜鈣結(jié)合蛋白的調(diào)節(jié) 目的：檢測腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)預(yù)處理急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜鈣結(jié)合蛋白parvalbumin(PV)、calbindinD-28k(CB)和calretinin(CR)的表達變化，探討B(tài)DNF保護節(jié)細(xì)胞(RGCs)的細(xì)胞內(nèi)機制。 方法：正常成年SD大鼠分為單純高眼壓(HIOP)模型組、溶媒對照組和BDNF

6、預(yù)處理組。溶媒對照組和BDNF預(yù)處理組大鼠左眼玻璃體內(nèi)注射溶媒或BDNF，2天后各組動物左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓(102.4mmHg±9.2mmHg)且維持缺血60分鐘，右眼設(shè)為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天后處死，視網(wǎng)膜冰凍切片作PV、CB和CR免疫組化反應(yīng)，鄰片用焦油紫染色。 結(jié)論：缺血再灌導(dǎo)致大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)元鈣結(jié)合蛋白PV、CB、CR表達的變化，PV、CB和CR的陽性神經(jīng)元對缺血敏