活血化瘀方劑對急性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜損傷的保護及對BDNF表達變化的影響.pdf

1、目的：觀察大鼠視網(wǎng)膜受到急性高眼壓損害后，活血化瘀方劑對其的保護作用及對腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF表達變化的影響。 方法：100只Wistar大鼠隨機分為A、B兩組，其中A組50只，HE染色光鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變，測定視網(wǎng)膜厚度，熒光免疫組織化學(xué)方法測定BDNF蛋白表達量的變化；B組50只，實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Real-Tim.quantitativ.revers.transcriptio.polymeras.cha

2、i.reaction.Real-Tim.qRT-PCR)測定BDNFmRNA的表達。每組又隨機分為10個小組，各小組數(shù)量相同。以A組為例，A0為正常對照組，A'為穿刺組，A1～A4為加壓組，A5～A8為加壓+中藥組。A1～A8組大鼠左眼采用前房灌注加壓法制作急性高眼壓模型，其中A1～A4組分別于加壓后1d，3d，7d，14d處死動物，A5～A8組在加壓后即刻給予活血化瘀方劑灌胃，并分別在給藥1d，3d，7d，14d后處死動物。B組分組方

3、法同A組。 結(jié)果：1.光鏡：加壓后1d，全層視網(wǎng)膜高度水腫，神經(jīng)纖維層和內(nèi)、外叢狀層水腫較明顯，RGCs排列疏松，數(shù)目減少，細胞核腫脹，核周出現(xiàn)空泡變性，視網(wǎng)膜厚度增加；加壓后3d，視網(wǎng)膜水腫較1d組減輕，RGCs胞核進一步腫脹，仍見空泡；加壓后7d，視網(wǎng)膜水腫基本消失，RGCs排列更加疏松，部分細胞核可見核溶解、壞死改變，視網(wǎng)膜厚度開始變薄；加壓后14d，視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)紊亂，內(nèi)、外核層密度明顯降低，RGCs數(shù)目稀少，細胞核形態(tài)

4、不規(guī)則，部分出現(xiàn)核碎裂改變，視網(wǎng)膜萎縮變薄。加壓+中藥組各時間點變化趨勢與加壓組相同，加壓后1天，加壓+中藥組視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層腫脹程度但較加壓組輕，加壓后3d、7d、14d，中藥組視網(wǎng)膜RGCs數(shù)量減少程度及視網(wǎng)膜萎縮程度較加壓組輕，且內(nèi)外核層密度較加壓組大。2.熒光免疫組織化學(xué)染色：加壓后1d，BDNF在RGCs層和內(nèi)核層的表達均明顯增強，達到高峰(P<0.01)；加壓后3天，BDNF的表達開始下降，但仍高于正常組(P<0.05)；加壓

5、后7天，BDNF的表達繼續(xù)下降；加壓后14d，BDNF熒光顆粒更加稀少，且熒光極弱(P<0.01)。BDNF蛋白在加壓+中物組各時間點的表達量均比同一時間點加壓組高(P<0.05)。3.Real-Tim.qRT-PCR半定量結(jié)果：加壓組的BDNFmRNA表達量1d開始升高，并達到高峰(P<0.01);3d時開始下降，但仍較正常組高(P<0.05)；加壓后7天，BDNFmRNA的表達繼續(xù)下降；14d時降至最低(P<0.01). BDNFm