活血化瘀湯對大鼠急性高眼壓模型視網(wǎng)膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討中藥活血化瘀湯方劑對大鼠急性高眼壓模型視網(wǎng)膜谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST表達(dá)的影響 方法：健康Wistar大鼠45只，隨機(jī)分為A、B、C三組，其中A組5只為正常對照組，B、C兩組每組各20只，隨機(jī)取其一眼制作急性高眼壓模型，B組為單純加壓組。C組于造模后灌胃給予活血化瘀湯，4ml/d，分別于給藥后1、3、7、14d每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取5只處死。B組在與C組相同的時(shí)間點(diǎn)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取5只處死。用熒光免疫組化及實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)

2、方法檢測大鼠急性高眼壓模型和正常大鼠視網(wǎng)膜中谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GLAST的表達(dá)變化，并對不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜組織行透射電鏡及光學(xué)顯微鏡觀察。 結(jié)果：1、光學(xué)顯微鏡：模型制作后第3天，視網(wǎng)膜變薄，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量有所減少；模型制作后第7天，視網(wǎng)膜進(jìn)一步變薄，特別是內(nèi)叢狀層，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量明顯減少；模型制作后第14天，視網(wǎng)膜厚度變的更薄，以內(nèi)層為甚，視網(wǎng)膜內(nèi)、外核層細(xì)胞排列稀疏，數(shù)量減少。各時(shí)間點(diǎn)活血化瘀湯治療組與單純加壓組相比，視

3、網(wǎng)膜的厚度較厚，存活的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量較多，損傷均輕于單純加壓組。 2、透射電子顯微鏡：模型制作后第1天見視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核染色質(zhì)凝集，細(xì)胞器退變，線粒體空泡變性，殘存線粒體嵴，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度腫脹，核周隙略有增寬，溶酶體腫大。模型制作后第14天見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目明顯減少，細(xì)胞器嚴(yán)重變性，核溶解，未見核膜和核仁，部分滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)崩解，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，極度擴(kuò)張，線粒體高度膨脹，破裂，內(nèi)腔有大量絮狀致密物，嵴消失，空泡變性。各時(shí)間點(diǎn)活

4、血化瘀湯治療組與單純加壓組相比，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的細(xì)胞器變性程度較輕，細(xì)胞凋亡的數(shù)量較少，損傷均輕于單純加壓組。 3、熒光免疫組織化學(xué)：(1)單純加壓組：GLAST的表達(dá)量在模型制作后1d快速上調(diào)，與正常對照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，3d時(shí)表達(dá)量下降(P<0.05)，7d時(shí)恢復(fù)至正常水平（P>0.05），14d時(shí)與正常對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)活血化瘀湯治療組：GLAST的表達(dá)量在模型制

5、作后1d快速上調(diào)，與正常對照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），與同時(shí)間點(diǎn)的單純加壓組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3d時(shí)表達(dá)量下降（P<0.01），與同時(shí)間點(diǎn)的單純加壓組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與正常對照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；7d，14d時(shí)與單純加壓組及正常對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>05）。 4、實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)：(1)單純加壓組：GLASTmRNA的表達(dá)量在模型制作

6、后1d快速上調(diào)，與正常對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，3d時(shí)表達(dá)量下降（P<0.01），7d時(shí)恢復(fù)正常水平(P>0.05)，14d時(shí)與正常對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05）；(2)活血化瘀湯治療組：GLASTmRNA的表達(dá)量在模型制作后1d快速上調(diào)，與正常對照組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），與同時(shí)間點(diǎn)的單純加壓組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);3d時(shí)表達(dá)量恢復(fù)至正常水平(P>0.05），與同時(shí)間點(diǎn)的

7、單純加壓組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；7d，14d時(shí)與單純加壓組及正常對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1、大鼠視網(wǎng)膜急性高眼壓損傷后，視網(wǎng)膜厚度變薄，以內(nèi)層為甚，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少，部分細(xì)胞凋亡。 2、在急性高眼壓損傷后各組GLAST的表達(dá)趨勢均呈現(xiàn)先快速上調(diào)、后漸下降、最終趨于正常水平的過程?；钛鰷委熃M較單純加壓組上調(diào)幅度高、降幅小、達(dá)到正常表達(dá)水平所需的時(shí)間短。