中藥復(fù)方VIS對(duì)急性高眼壓大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究中藥復(fù)方VIS對(duì)急性高眼壓大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（Retinal ganglion cells，RGCs）損害的干預(yù)作用，探討其視神經(jīng)保護(hù)的可能機(jī)制。
　　方法：（1）利用前房灌注生理鹽水方法，急性升高大鼠右眼眼壓1小時(shí)，然后給予復(fù)方VIS治療，分別在1、3、7、14天時(shí)急性分離視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，通過(guò)全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察RGCs上電壓門控通道的外向鉀離子電流。將細(xì)胞膜電位鉗制在-70 mV，然后給予一系列400 ms的去極

2、化脈沖刺激，以10 mV的遞增使細(xì)胞去極化到+20 mV，從而誘導(dǎo)出外向鉀電流，分析不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的外向鉀電流變化情況。（2）采用VIS中的組成成分燈盞細(xì)辛提取物DSX，直接作用于急性分離的正常大鼠的RGCs上，以同樣的全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄胞外施加0.1g/L濃度的DSX的作用趨勢(shì)，又以不同濃度的燈盞細(xì)辛提取物DSX胞外給藥，觀察其對(duì)RGCs外向鉀電流的影響。（3）利用TUNEL凋亡染色技術(shù)與Western Blot技術(shù)觀察在急性高眼壓模

3、型后七天，急性高眼壓模型組、急性高眼壓模型+VIS灌胃組、急性高眼壓+DSX灌胃組及假手術(shù)組與空白對(duì)照組之間的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡信號(hào)的差異與蛋白表達(dá)的差異性。
　　結(jié)果：中藥提取物復(fù)方VIS對(duì)急性眼內(nèi)壓升高后的RGCs有穩(wěn)定其外向鉀離子電流的作用；燈盞細(xì)辛提取物DSX對(duì)外向鉀電流的穩(wěn)態(tài)和峰值電流幅度均呈電壓依賴性壓抑。而且DSX濃度依賴性地且可逆地壓抑外向鉀電流，在+20 mV的膜電位下，0.02g/L和0.05 g/L的藥物對(duì)電流沒(méi)

4、有明顯的作用，穩(wěn)態(tài)電流幅度分別為對(duì)照的101.7±4.1％(n=7，P>0.05)和90.8±4.2%(n=6，P>0.05)，然而當(dāng)藥物濃度增加到0.1 g/L，0.2 g/L和0.5 g/L時(shí)，電流幅度分別降低到對(duì)照的76.8±8.7%(n=5，P＜0.05)，55.3±4.3%(n=7，P＜0.01)和69.2±6.7%(n=7，P＜0.01)；TUNEL凋亡檢測(cè)及Western Blot蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示，急性高眼壓手術(shù)后第七天，