腦脊液細胞學免疫化學染色與激光共聚焦顯微鏡檢測對腦膜癌病的診斷價值.pdf

1、目的：流行病學調(diào)查表明，惡性腫瘤死亡率位居全世界死亡疾病之首，故腫瘤是威脅人類生命健康的日益嚴重的疾病。而作為惡性腫瘤的一種特殊類型——腦膜癌病（meningeal carcinomatosis），是中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉移癌的一種特殊類型，是惡性腫瘤廣泛轉移浸潤蛛網(wǎng)膜下腔，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)實質(zhì)本身無肉眼或顯微鏡可見的浸潤病灶的一類非獨立性病。在實體腫瘤患者中發(fā)生率約為5％，死亡率極高。它常發(fā)生于原發(fā)病灶出現(xiàn)癥狀之前，且臨床表現(xiàn)無特征性，患者早期

2、臨床表現(xiàn)往往僅有腦膜刺激征和顱內(nèi)壓增高，隨后可相繼出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，甚至出現(xiàn)全腦癥狀。其中以腦膜刺激征最常見，故極易與腦膜炎相混淆而誤診，又稱癌性腦膜炎。因其在顱內(nèi)不形成實體腫塊，所以影像學診斷困難，既往活體診斷率幾乎為零。上述原因致使很多患者在確診時往往已是疾病的晚期，失去了治療的機會，給家庭和社會帶來極大的危害。腦脊液細胞學的出現(xiàn)使腦膜癌病達到活體診斷水平，成為國內(nèi)外診斷腦膜癌病的首選方法，腦脊液細胞學MGG染色即我們通常意義上的細

3、胞學常規(guī)染色方法，但其僅依賴于細胞形態(tài)學變化，對于異型性不典型細胞易誤診漏診，因此本研究把腦脊液細胞學癌胚抗原（CEA）免疫細胞化學染色與激光掃描共聚焦顯微鏡（LSCM）檢測技術應用于腦膜癌病診斷中來，以使腦膜癌病的診斷提高到分子水平，減少漏診誤診。
　　 方法：河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2003年2月——2008年7月入院既在我院確診患者，腦膜癌病組42例，均于入院后24～48小時內(nèi)行腰椎穿刺術留取腦脊液，根據(jù)標本量多少，將

4、MC患者CSF標本離心沉淀后分別進行進行邁格姬氏染色（42例）、CEA免疫細胞化學染色（29例）、免疫熒光雙標記染色（17例），其中CEA免疫細胞化學染色與免疫熒光雙標記染色分別設有對照組20例，與病例組同樣方法收集標本染色。將邁格姬氏染色、CEA免疫細胞化學染色后的玻片至于光鏡下觀察，免疫熒光染色玻片置于激光共聚焦顯微鏡下觀察，并對其進行定位、定性、定量分析及三維圖像的重建。比較三種方法的敏感性、特異性及其優(yōu)略性。
　　 結果

5、：42例患者均經(jīng)腦脊液細胞學檢查發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞，首次腦脊液細胞學檢查陽性率為85.71％（36/42），其中29例患者結合CEA免疫細胞化學染色，陽性率為79.31％（23/29），17例經(jīng)免疫熒光雙標記染色，陽性率為76.47％（13/17），三者之間陽性率兩兩比較P>0.05。免疫熒光染色呈現(xiàn)胞核藍色、胞漿胞膜紅色者為腦膜癌病CEA陽性細胞；只有藍色胞核，胞漿胞膜未顯色者為腦膜癌病CEA陰性細胞或非腦膜癌病細胞；定量分析對照組細胞核D

6、NA熒光值范圍946.000-184.284，胞漿胞膜CEA熒光值范圍360.686-90.321；MC組CEA（+）者細胞核DNA相對含量范圍為2710.135-793.863，及CEA熒光相對含量范圍為2104.515-853.274，與對照組比較均有非常顯著性差異（P<0.01）；MC組CEA（-）者細胞核DNA相對含量與對照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），CEA平均熒光值與對照組比較無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。

7、　　 結論：
　　 1、腦脊液細胞學MGG染色是目前診斷MC的主要基本手段。
　　 2、腦脊液細胞學免疫細胞化學染色為MC定性診斷提供了有力佐證。
　　 3、激光共聚焦顯微鏡與免疫熒光技術把MC的診斷提高到定性、定位與定量相結合的新水平，尤其定量分析顯示MC患者細胞核DNA平均熒光值較非MC患者細胞核DNA平均熒光值具有成倍性差異，對MC患者免疫細胞化學染色腫瘤標記物陰性者具有診斷意義。
　　 4、三種