舌黏膜重建尿道的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為如下三部分： 第一部分:游離犬舌黏膜重建尿道的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討舌黏膜游離移植替代尿道的可行性和有效性。 方法；將隨機(jī)選定的10條雜種雌犬剝離尿道黏膜4cm×1cm后用等面積的舌黏膜替代尿道。術(shù)后留置硅膠導(dǎo)尿管1周，拔除尿管后觀察排尿情況。3月后對(duì)10條實(shí)驗(yàn)犬行逆行尿道造影檢測(cè)尿道通暢情況，并用10Fr尿管證實(shí)有無狹窄。隨后處死實(shí)驗(yàn)犬測(cè)定移植物長度并行病理組織學(xué)檢查，以觀察舌黏膜移植至尿道后組織學(xué)上改

2、變。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)犬全部存活。10條中9條排尿通暢；1條發(fā)生尿道狹窄：無尿瘺發(fā)生。移植的舌黏膜存活良好；在舌黏膜與尿道黏膜交界處，舌黏膜的鱗狀上皮有漸被尿道的移行上皮替代趨勢(shì)。 結(jié)論：犬的尿道黏膜可用舌黏膜替代。 第二部分:犬舌黏膜與頰黏膜組合移植重建尿道的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討犬舌黏膜與頰黏膜組合移植替代尿道的可行性和有效性。 方法：將隨機(jī)選定的7條雜種雌犬剝離尿道黏膜4cm×1cm，然后取大小為2

3、cm×1cm舌側(cè)面黏膜和頰黏膜各一塊，將二者拼接后移植至尿道內(nèi)恢復(fù)尿道黏膜的連續(xù)性。術(shù)后留置硅膠導(dǎo)尿管1周，拔除尿管后觀察排尿情況。平均觀察3月后對(duì)10條實(shí)驗(yàn)犬行逆行尿道造影檢測(cè)尿道通暢情況，并用10Fr尿管證實(shí)有無狹窄。隨后處死實(shí)驗(yàn)犬測(cè)定移植物長度并行病理組織學(xué)檢查，觀察舌黏膜與頰黏膜拼接移植至尿道后組織學(xué)上改變。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)犬全部存活。7條中6條排尿通暢：1條發(fā)生尿道狹窄；無尿瘺發(fā)生。排尿通暢犬尿道內(nèi)移植的舌黏膜與頰黏膜存活

4、良好；舌黏膜與頰黏膜交界處愈合良好無狹窄發(fā)生，鱗狀上皮呈連續(xù)分布。組合移植黏膜的鱗狀上皮與尿道的移行上皮區(qū)分明顯，移植黏膜的鱗狀上皮有漸被尿道的移行上皮替代的趨勢(shì)。 結(jié)論：犬舌黏膜和頰黏膜拼接移植可替代尿道黏膜并恢復(fù)尿道的連續(xù)性。 第三部分:組織工程舌黏膜構(gòu)建的初步研究 目的：探討舌黏膜細(xì)胞為種子細(xì)胞與同種異體膀胱黏膜下脫細(xì)胞基質(zhì)(B1adderacellularmatrixgraft，BAMG)復(fù)合構(gòu)建組織工程

5、舌黏膜的方法。 方法：取雄性新西蘭大耳白兔(體重0.3～0.5kg)舌黏膜組織，分離獲得舌黏膜細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，定期觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長增殖情況。對(duì)體外培養(yǎng)獲得的舌黏膜細(xì)胞進(jìn)行廣譜角蛋白抗體(AE1/AE3)免疫熒光染色鑒定；流式細(xì)胞儀檢測(cè)第2代培養(yǎng)細(xì)胞的AE1/AE3陽性細(xì)胞百分比，細(xì)胞計(jì)數(shù)及MTT測(cè)定以判斷細(xì)胞增殖能力。取同種異體兔膀胱經(jīng)脫細(xì)胞處理制成BAMG，隨機(jī)取小塊組織行HE和Mason染色觀察脫細(xì)胞效果，然后將第二代體

6、外培養(yǎng)的舌黏膜細(xì)胞種植于BAMG上，HE染色及掃描電鏡觀察舌黏膜細(xì)胞與BAMG復(fù)合情況。 結(jié)果：舌黏膜細(xì)胞形態(tài)均一有較強(qiáng)的增殖能力可傳代至4～5代，傳至第4代時(shí)開始出現(xiàn)老化，細(xì)胞貼壁及增殖能力均明顯減弱。免疫熒光染色顯示，近100％體外培養(yǎng)獲得的舌黏膜細(xì)胞AE1/AE3免疫熒光染色陽性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，第2代舌黏膜細(xì)胞AE1/AE3陽性細(xì)胞百分比大于96％。舌黏膜細(xì)胞傳至第3代時(shí)可獲得細(xì)胞數(shù)量在20×106以上，完全可滿