自體口腔黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)眼表重建的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：將自體培養(yǎng)的口腔黏膜上皮植片移植于重度堿燒傷后角膜緣功能完全缺損的動(dòng)物眼表，分期觀察上皮恢復(fù)情況及其新生血管的生長情況，為該組織工程重建眼表的方法早日投入臨床使用提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：取6月齡健康家白兔54只，體重(2.5±0.2)kg，對所有家兔行單眼燒傷，制備重度堿燒傷模型．，然后隨機(jī)分為A、B、C三組，每組18只，雌雄不拘。A組為對照組不行移植；B組為單純羊膜移植組；C組為自體培養(yǎng)的口腔黏膜細(xì)胞移植組。術(shù)后每日

2、在裂隙燈下觀察角膜上皮染色、角膜混濁度以及新生血管生長情況并進(jìn)行評分；并利用圖像分析系統(tǒng)測定角膜新生血管(corneal neovascularization，CNV)長度，計(jì)算CNV面積；每組在術(shù)后1w、2w、4w分別隨機(jī)處死6只家兔，摘取角膜作病理切片，HE染色觀察角膜各層結(jié)構(gòu)，利用Image pro plus6.0圖象分析系統(tǒng)測量角膜微血管數(shù)量；免疫熒光法檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascular endothelial fact

3、or，VEGF)表達(dá)；利用印跡細(xì)胞技術(shù)觀察角膜上皮重建情況。 結(jié)果：自體體外培養(yǎng)的兔口腔黏膜細(xì)胞可在角膜基質(zhì)上繼續(xù)增殖、分化為密集的上皮細(xì)胞層；移植后1、2、4w各個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別比較三組角膜上皮染色、混濁度以及新生血管生長情況并進(jìn)行評分，A、B兩組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為：0.097、0.505、0.309)，A組與C組比較，B組與C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。移植術(shù)后第2w比較CNV面積及血管計(jì)數(shù)，A組

4、B組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(面積P=0.518、血管計(jì)數(shù)P=0.072)，A組與C組比較，B組與C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。移植術(shù)后第1w對VEGF的表達(dá)進(jìn)行比較，三組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其中C組(口腔黏膜上皮細(xì)胞移植組)總評分均數(shù)最少、CNV面積最小，微血管計(jì)數(shù)最少、VEGF陽性表達(dá)量最少。印跡細(xì)胞檢查：A、B組角膜上皮均發(fā)現(xiàn)杯狀細(xì)胞，C組角膜上皮未發(fā)現(xiàn)杯狀細(xì)胞。 結(jié)論： 1．