兔氣管黏膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩51頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   目前,氣管外傷、腫瘤切除等均可引起氣管缺損,較為理想的治療方法是行一期端端吻合。但當(dāng)氣管缺損長(zhǎng)度超過一定的長(zhǎng)度時(shí),則無法進(jìn)行無張力吻合,必須植入氣管代替物才能重建其連續(xù)性,維持呼吸道通暢。因此,利用組織工程學(xué)的原理和技術(shù)在體外構(gòu)建出具有氣管主要生理功能的生物活性人工氣管作為移植物修復(fù)氣管缺損成為研究熱點(diǎn)。但是人工氣管置換氣管后管腔內(nèi)上皮細(xì)胞的再生依賴于從宿主氣管鄰近部分上皮細(xì)胞的遷移,通常造成靠近吻合口區(qū)域存在完整

2、的上皮細(xì)胞,而管腔內(nèi)表面的中部沒有成熟的上皮細(xì)胞覆蓋。缺乏發(fā)育良好的上皮細(xì)胞層常常導(dǎo)致管腔狹窄和肉芽增生,影響假體移植后管腔的開放而導(dǎo)致失敗。氣管黏膜上皮細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)是解決該難題的重要工具之一,本研究擬建立氣管黏膜上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,觀察細(xì)胞在體外生長(zhǎng)及傳代的規(guī)律,為組織工程氣管假體的上皮化提供技術(shù)支持。
   方法:
   一、分離培養(yǎng):(1)從4月齡新西蘭大耳兔取出氣管(甲狀軟骨至氣管分叉),剔除氣管周圍纖維結(jié)締

3、組織,沖洗氣管至蒼白并且無黏液為止。(2)剪開氣管、撕取黏膜,將黏膜置于含有抗生素的PBS液中浸泡除菌。(3)將黏膜剪成約1mm×1mm大小的小塊。(4)將黏膜組織小塊移入培養(yǎng)瓶中,置入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(5)對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞采用刮除法結(jié)合消化排除法純化。
   二、細(xì)胞鑒定:對(duì)純化后的細(xì)胞通過SABC法免疫組化鑒定、FITC標(biāo)記的熒光抗體免疫熒光鑒定。
   三、傳代與凍存:(1)對(duì)純化的細(xì)胞進(jìn)行傳代研究,并觀察細(xì)胞在體外的生長(zhǎng)

4、規(guī)律。(2)對(duì)純化后的細(xì)胞進(jìn)行凍存與復(fù)蘇的研究。
   結(jié)果:
   一、細(xì)胞培養(yǎng):(1)培養(yǎng)約5~6d可見組織塊邊緣少量上皮樣細(xì)胞爬出。此后,組織塊周圍上皮樣細(xì)胞覆蓋面積逐漸增大,細(xì)胞呈現(xiàn)三角形、梭形、圓形、多角形、不規(guī)則形等。高倍鏡下可見部分細(xì)胞頂面伸出纖毛,在培養(yǎng)液中不斷擺動(dòng)。10d后去除組織塊,14~15d時(shí),細(xì)胞基本長(zhǎng)滿瓶壁,有纖毛的細(xì)胞無增殖。(2)通過刮除法結(jié)合消化排除法純化后的細(xì)胞純度較高。
  

5、 二、細(xì)胞鑒定:(1)SABC法染色檢測(cè)細(xì)胞中角蛋白,胞質(zhì)棕黃色,胞核淡藍(lán)色,結(jié)果表明分離培養(yǎng)的細(xì)胞為上皮細(xì)胞。(2)FITC標(biāo)記的熒光抗體檢測(cè)細(xì)胞中的角蛋白,胞質(zhì)亮綠色,可見整個(gè)細(xì)胞形態(tài),表明分離培養(yǎng)的細(xì)胞為上皮細(xì)胞。
   三、傳代與凍存:(1)細(xì)胞可以連續(xù)傳代至第5代,傳代后細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)良好,細(xì)胞隨著代數(shù)的增加細(xì)胞體積逐漸變大。傳代后未見有纖毛的細(xì)胞。第2~4代細(xì)胞貼壁及生長(zhǎng)時(shí)間無明顯差異,第5代細(xì)胞貼壁數(shù)量明顯減少,生

6、長(zhǎng)緩慢,細(xì)胞體積與前幾代相比明顯變大。(2)本實(shí)驗(yàn)復(fù)蘇凍存3個(gè)月的細(xì)胞,復(fù)蘇后細(xì)胞存活率、貼壁率較高。經(jīng)過本方法凍存與復(fù)蘇的細(xì)胞,經(jīng)過體外培養(yǎng),細(xì)胞活性、增殖能力仍然能夠恢復(fù)到凍存前水平。
   結(jié)論:
   本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用組織塊法成功構(gòu)建出一種較為經(jīng)濟(jì)、便捷、可傳代、可重復(fù)的兔氣管黏膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)模型。成功對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定、傳代與凍存的研究,為氣管黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)提供了技術(shù)可行性,為組織工程人工氣管的上皮化提供理論

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論