組織工程尿道黏膜體外構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、尿道缺損是泌尿外科臨床常見的疾病，包括先天性尿道下裂、尿道上裂和各種類型的尿道狹窄等。目前臨床上常應(yīng)用局部陰莖陰囊皮瓣、口腔粘膜上皮、膀胱粘膜上皮、帶蒂睪丸鞘膜等進(jìn)行尿道上皮替代修復(fù)。然而長段的尿道缺損往往由于自體修復(fù)材料有限，使其在臨床外科重建中的應(yīng)用受到限制而無法得到良好的醫(yī)治。組織工程技術(shù)的發(fā)展應(yīng)用，可能最終解決泌尿系組織來源受限的問題，將為泌尿系外科重建提供最佳的修復(fù)材料。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用兒童包皮表皮細(xì)胞作為種子細(xì)胞，

2、以鼠尾膠原制成的膠原膜作為支架材料，進(jìn)行細(xì)胞一材料復(fù)合物的體外構(gòu)建、培育，觀察可否培育成尿道上皮組織，希望為組織工程尿道從建提供最佳的替代修復(fù)材料。
　　 目的：
　　 探索人體包皮表皮細(xì)胞分離培養(yǎng)的最佳方法，為組織工程尿道重建提供種子細(xì)胞；探索以包皮表皮細(xì)胞為種子細(xì)胞，以膠原膜為支架材料體外構(gòu)建組織工程尿道黏膜的可行性。
　　 方法：
　　 采用機(jī)械分離與酶消化法獲得兒童包皮表皮細(xì)胞，以免疫組織化學(xué)方法

3、進(jìn)行細(xì)胞鑒定。制備膠原膜作為支架材料，以HE染色、免疫組織化學(xué)和掃描電鏡進(jìn)行評(píng)價(jià)。分離細(xì)胞經(jīng)體外原代培養(yǎng)與傳代擴(kuò)增，將細(xì)胞接種于自制膠原膜上，體外聯(lián)合培養(yǎng)72d，通過對(duì)復(fù)合物的倒置顯微鏡、掃描電鏡、HE染色及角蛋白的免疫組織化學(xué)檢測(cè)，了解細(xì)胞在支架材料上的生長情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、用胰蛋白酶和中性蛋白酶消化相結(jié)合的方法，可分離出較多的表皮細(xì)胞，且成纖維細(xì)胞污染少。
　　 2、經(jīng)抗人角蛋白為一抗，免疫組織

4、化學(xué)染色鑒定，進(jìn)一步證實(shí)所分離的細(xì)胞為表皮細(xì)胞。
　　 3、以K-SFM作為培養(yǎng)基，細(xì)胞生長增殖良好，純度高，無成纖維細(xì)胞污染。
　　 4、膠原膜支架上的細(xì)胞經(jīng)過體外培養(yǎng)后，細(xì)胞可較均勻的分布及吸附在膜表面，并沿基膜排列形成復(fù)層樣結(jié)構(gòu)。掃描電鏡顯示細(xì)胞-材料復(fù)合良好，免疫組織化學(xué)檢測(cè)支架上的細(xì)胞廣譜角蛋白表達(dá)陽性，證明上皮細(xì)胞分離培養(yǎng)的表皮細(xì)胞能在膠原膜上生長。
　　 結(jié)論：
　　 該實(shí)驗(yàn)方法獲取的包皮表