慢性應(yīng)激對(duì)大鼠血清HSP70、Corticosterone的影響及腎氣丸的干預(yù)作用.pdf

1、研究目的 慢性應(yīng)激(chronicstress，CS)反應(yīng)的整體適應(yīng)性研究是生理學(xué)整體水平研究方法的內(nèi)容之一。當(dāng)機(jī)體受到刺激時(shí)，神經(jīng)一內(nèi)分泌系統(tǒng)的主要變化為藍(lán)斑—交感—腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)及下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)軸的興奮，并伴有其他多種內(nèi)分泌激素的改變。熱休克蛋白(heatshockproteins，HSPs)是一種進(jìn)化上高度保守的應(yīng)激蛋白，存在于細(xì)菌到人類(lèi)的各種生物中。HSP70是HSP家族中含量最豐富的一類(lèi)，主要參與蛋白質(zhì)的折疊

2、、裝配、降解和修復(fù)過(guò)程，調(diào)節(jié)蛋白活性，介導(dǎo)蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，維護(hù)蛋白的自穩(wěn)系統(tǒng)等。在正常情況下大多數(shù)組織細(xì)胞內(nèi)其含量很低，而當(dāng)機(jī)體遭受各種生理或病理或心理應(yīng)激時(shí)表達(dá)會(huì)明顯增加。在實(shí)驗(yàn)一中選擇正常健康的大鼠為研究對(duì)象，不破壞其機(jī)體完整性，分別給予代表運(yùn)動(dòng)性生理應(yīng)激的適宜游泳和具有典型身心應(yīng)激特征的束縛應(yīng)激及兩者復(fù)合三種慢性應(yīng)激方式，并測(cè)定大鼠應(yīng)激后血清HSP70及皮質(zhì)酮含量，觀察分析機(jī)體應(yīng)激程度及整體性蛋白標(biāo)志物HSP70在不同應(yīng)激方式下的反應(yīng)情

3、況，從分子蛋白水平研究適宜運(yùn)動(dòng)，慢性束縛以及兩者復(fù)合對(duì)機(jī)體整體性的影響。在實(shí)驗(yàn)二中選擇慢性束縛為慢性應(yīng)激方式對(duì)正常健康的大鼠造成慢性應(yīng)激模型，并觀察中藥腎氣丸湯劑對(duì)慢性應(yīng)激的干預(yù)作用。 研究方法 實(shí)驗(yàn)一： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成熟雄性Wistar大鼠48只，體重(270±10)g2.實(shí)驗(yàn)分組：大鼠行常規(guī)飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)一周后隨機(jī)分4組，每組12只，為對(duì)照組，游泳組，束縛組，復(fù)合組(游泳+束縛組)。 3.動(dòng)物模型的

4、制備：游泳組：每天按時(shí)完成無(wú)負(fù)重適宜游泳運(yùn)動(dòng)，連續(xù)4周。束縛組：每天按時(shí)施以1次束縛應(yīng)激，連續(xù)4周。復(fù)合組(游泳+束縛組)：應(yīng)激方式和時(shí)間分別與束縛組，游泳組相同，兩種應(yīng)激方式間隔30min，其次序每周輪換。 4.大鼠血清HSP70及皮質(zhì)酮的檢測(cè)：對(duì)照組飼養(yǎng)4周，各實(shí)驗(yàn)組應(yīng)激滿(mǎn)4周，于應(yīng)激后24h內(nèi)斷頭取血，離心，分離血清，使用ELISA試劑盒定量檢測(cè)大鼠血清HSP70和皮質(zhì)酮的含量。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)

5、±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行析因方差分析。 實(shí)驗(yàn)二： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成熟雄性Wistar大鼠48只，體重(270±10)g2.實(shí)驗(yàn)分組：大鼠行常規(guī)飼料喂養(yǎng)，適應(yīng)一周后隨機(jī)分4組，每組12只，為對(duì)照組，束縛組，中藥組，中藥對(duì)照組。束縛組，中藥組，中藥對(duì)照組：每天按時(shí)施以1次束縛應(yīng)激，連續(xù)4周。 3.實(shí)驗(yàn)用藥：實(shí)驗(yàn)所用中藥復(fù)方選用《金匱要略》中的腎氣丸湯劑，實(shí)驗(yàn)所用中藥對(duì)照為單味甘草煎煮

6、湯劑。 4.中藥灌胃：自應(yīng)激第3周(即第15天)開(kāi)始，中藥組，中藥對(duì)照組于每天應(yīng)激前1h分別灌服腎氣丸湯劑及單味甘草煎煮湯劑Sml，連續(xù)2周。 5.大鼠血清HSP70及皮質(zhì)酮的檢測(cè)：對(duì)照組飼養(yǎng)4周，各實(shí)驗(yàn)組應(yīng)激滿(mǎn)4周，于應(yīng)激后24h內(nèi)斷頭取血，離心，分離血清，使用ELISA試劑盒定量檢測(cè)大鼠血清HSP70和皮質(zhì)酮的含量。 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行隨

7、機(jī)分組方差分析。 研究結(jié)果 1.實(shí)驗(yàn)一：與對(duì)照組比較，各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量均升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，游泳與束縛兩個(gè)條件有交互作用；各實(shí)驗(yàn)組兩兩之間大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量有差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2.實(shí)驗(yàn)二：與對(duì)照組比較，束縛組與中藥對(duì)照組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量均升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中藥組大鼠血清HSP70含量及皮質(zhì)酮含量差異無(wú)