亞慢性B[a]P染毒大鼠海馬組織Hsp70結(jié)合蛋白的研究.pdf

1、目的：
　　 國內(nèi)外研究表明，苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene，B[a]P）具有神經(jīng)毒性，可損傷人和動物的學習記憶能力。熱休克蛋白70(Heatshockprotein，Hsp70)作為分子伴侶，可能參與B[a]P神經(jīng)毒性機制。但具體機制尚不清楚。本研究擬通過建立亞慢性染毒B[a]P大鼠神經(jīng)行為損傷模型，檢測分析大鼠海馬組織Hsp70交互作用蛋白，探討Hsp70參與B[a]P神經(jīng)毒性的可能途徑和機制。
　　 方

2、法:
　　 選擇健康雄性SD大鼠40只，隨機分為無處理組，空白對照組，溶劑對照組和B[a]P染毒組，隔日腹腔注射染毒B[a]P90天。Morris水迷宮進行行為學測試；Westem-blot檢測大鼠海馬Hsp70蛋白的表達水平；免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜分析技術(shù)檢測海馬組織Hsp70結(jié)合蛋白。激光共聚焦技術(shù)觀察Hsp70交互作用蛋白分布和定位。
　　 結(jié)果:
　　 Morris水迷宮結(jié)果顯示，B[a]P染毒組大鼠的尋找

3、平臺平均潛伏期顯著高于空白對照組和溶劑對照組，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；B[a]P染毒組大鼠穿越平臺次數(shù)、平臺象限滯留時間和平臺象限滯留時間百分比顯著低于空白對照組和溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 Westem-blot結(jié)果顯示，B[a]P染毒組Hsp70蛋白的表達水平顯著低于空白對照組和溶劑對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 免疫共沉淀和質(zhì)譜鑒定結(jié)果顯示，無處理組、對照組和B

4、[a]P染毒組鑒定出的Hsp70結(jié)合蛋白數(shù)量分別為410、482和609。根據(jù)功能將這些蛋白分為骨架蛋白、伴侶蛋白、信號轉(zhuǎn)導相關(guān)蛋白、DNA損傷相關(guān)蛋白、修復(fù)相關(guān)蛋白、代謝相關(guān)蛋白、細胞凋亡相關(guān)蛋白、氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白、腫瘤相關(guān)蛋白、神經(jīng)發(fā)育及神經(jīng)遞質(zhì)生成和轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白、功能未知蛋白等11類。無處理組、對照組和B[a]P染毒組均與Hsp70結(jié)合的蛋白有333種，其中與學習記憶功能相關(guān)的蛋白包括CaMKⅡα亞基、PKCα和β亞型、PKAα和

5、β亞型、MAPK1和3、谷氨酸受體2前體、鈣調(diào)蛋白、14-3-3蛋白、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P、泛素C末端水解酶L1、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白、突觸結(jié)合蛋白1和2、突觸囊泡蛋白、細胞色素c氧化酶Ⅱ亞基、神經(jīng)細胞粘附分子1前體等。與無處理組相比，經(jīng)過學習記憶訓練后的對照組大鼠海馬組織新出現(xiàn)118種Hsp70結(jié)合蛋白，其中與學習記憶功能相關(guān)蛋白的包括神經(jīng)顆粒素、β-連環(huán)蛋白、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶、糖原合成酶激酶3β、細胞色素C等；有46種蛋白不再與Hsp70結(jié)合

6、，其中與學習記憶功能相關(guān)的蛋白包括突觸融合蛋白7、電壓依賴性陰離子選擇性通道蛋白2等。與對照組相比，B[a]P染毒組新出現(xiàn)198種Hsp70結(jié)合蛋白，其中與學習記憶功能相關(guān)的蛋白包括F-actin-cappingproteinsubunitbeta、金屬硫蛋白3、Complexin-1、Complexin-2等；有74種蛋白不再與Hsp70結(jié)合，其中與學習記憶功能相關(guān)的蛋白包括谷氨酸受體1前體、電壓依賴性鈣通道蛋白γ8亞基、二氫嘧啶相關(guān)

7、蛋白4、神經(jīng)顆粒素、谷氨酸脫羧酶等。
　　 激光共聚焦實驗結(jié)果顯示，PKC、PKA、NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B蛋白與Hsp70共表達。
　　 結(jié)論:
　　 1、亞慢性染毒B[a]P可導致大鼠的學習記憶功能損傷，抑制海馬Hsp70的表達。
　　 2、Hsp70可能通過調(diào)節(jié)其結(jié)合蛋白，參與大鼠海馬神經(jīng)細胞信號通路、細胞凋亡、氧化應(yīng)激、神經(jīng)發(fā)育、神經(jīng)遞質(zhì)生成和轉(zhuǎn)運等過程。Hsp70可能通過結(jié)合

8、CaMKⅡ、PKC、PKA、MAPK1和3、谷氨酸受體2前體、鈣調(diào)蛋白、神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白、突觸結(jié)合蛋白1和2、突觸囊泡蛋白等，參與海馬LTP信號通路等學習記憶機制。亞慢性染毒B[a]P導致的海馬組織Hsp70表達水平降低，可能影響大鼠正常的生理過程和學習記憶過程。
　　 3、神經(jīng)顆粒素可能與學習訓練后空間學習記憶的形成有關(guān)。Hsp70可與其結(jié)合，可能參與了其生成、轉(zhuǎn)運、折疊及功能的發(fā)揮。
　　 4、亞慢性染毒B[a]P可影響