GGA誘導(dǎo)AD大鼠海馬HSP70表達(dá)及其抗細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的:阿爾茨海默病(AD)是一種以進(jìn)行性記憶力減退、認(rèn)知功能障礙為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未完全清楚。近年研究發(fā)現(xiàn)，AD腦內(nèi)存在熱休克蛋白70(heat shock protein 70)表達(dá)變化，并和神經(jīng)元的存活有關(guān)聯(lián)。HSP是細(xì)胞受到各種刺激時(shí)產(chǎn)生的高度保守的具有重要生理功能的多肽類蛋白質(zhì)分子家族，可通過分子伴侶作用調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)功能及抗氧化、抗凋亡等作用提高細(xì)胞對(duì)應(yīng)激原的耐受，保護(hù)細(xì)胞抗損傷。目

2、前已證實(shí)，抗?jié)兯幬?GGA)可明顯誘導(dǎo)大鼠胃腸、肝臟、心臟、視網(wǎng)膜等多種器官組織甚至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的HSP70表達(dá)。國外已將其應(yīng)用于腦血管病動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)可明顯誘導(dǎo)腦內(nèi)HSP70表達(dá)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用?，F(xiàn)國內(nèi)外均尚未有將GGA用于AD研究的報(bào)道。我們通過實(shí)驗(yàn)建立AD大鼠模型，觀察模型大鼠以及GGA灌胃干預(yù)后其海馬HSP70表達(dá)的情況和行為組織學(xué)改變，研究GGA誘導(dǎo)AD大鼠海馬HSP70表達(dá)及其神經(jīng)保護(hù)作用并探討可能機(jī)制，為臨床治療AD提

3、供新的理論基礎(chǔ)和方法。 方法:健康雄性SD大鼠144只隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、GGA干預(yù)組，每組各48只，其中，每組又分為術(shù)后1天、術(shù)后7天、術(shù)后14天和術(shù)后21天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各時(shí)間點(diǎn)每組12只大鼠。模型組和GGA干預(yù)組大鼠雙側(cè)海馬注射Aβ1-42，對(duì)照組注射等量溶媒。術(shù)后大鼠清醒后GGA組即予GGA800mg/kg/d灌胃，余兩組予等量生理鹽水灌胃，持續(xù)21天。術(shù)前及術(shù)后7天、14天、21天Y迷宮測(cè)試各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；各時(shí)

4、間點(diǎn)行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后處死動(dòng)物，每組取6只大鼠腦組織冰凍切片行HE染色，觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元形態(tài)改變；剛果紅染色觀察Ap的沉積；每組再各取6只用RT-PCR和Western-blot測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)大鼠海馬HSP70基因和蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果: 1.術(shù)前各組大鼠獲得記憶所需電擊次數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨時(shí)間的推移，模型組大鼠達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所需電擊次數(shù)逐漸增加，術(shù)后14天與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后21天模型組大鼠學(xué)習(xí)記

5、憶能力下降最顯著。GGA組大鼠術(shù)后14天、21天達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所需電擊次數(shù)雖較對(duì)照組仍有增加，但較模型組明顯減少，學(xué)習(xí)記憶能力明顯改善。 2.對(duì)照組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列整齊、均勻，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整；模型組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列不均勻、結(jié)構(gòu)紊亂不整齊、不清楚，神經(jīng)元減少，至術(shù)后21天病理改變最顯著；GGA組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)CA1區(qū)細(xì)胞較模型組排列相對(duì)整齊、均勻，結(jié)構(gòu)也較其完整，神經(jīng)元減少有所改善。 3.模型組大鼠腦組織切片剛

6、果紅染色，在海馬CA1區(qū)與齒狀回之間可見染色陽性的物質(zhì)，周圍小膠質(zhì)細(xì)胞相對(duì)較聚集，可能為Aβ沉積。對(duì)照組大鼠腦組織切片剛果紅染色未見Aβ沉積，GGA干預(yù)組切片亦未發(fā)現(xiàn)明顯的Aβ沉積。 4.模型組和GGA組大鼠術(shù)后1天海馬HSP70mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)和對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后7天、14天、21天模型組大鼠海馬HSP70mRNA和蛋白表達(dá)較對(duì)照組逐步減少，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)GGA組大鼠海馬HSP70mRN