復(fù)元愈肝膠囊對(duì)脂肪肝大鼠影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的 復(fù)元愈肝膠囊以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)成果而創(chuàng)制，在臨床應(yīng)用中對(duì)多種原因引起的脂肪肝療效顯著，為闡明其藥理作用，探討其作用機(jī)制，本課題觀察復(fù)元愈肝膠囊對(duì)脂肪肝模型大鼠的防治作用，為臨床提供科學(xué)依據(jù)，并為進(jìn)一步研究和新藥開發(fā)打下良好的基礎(chǔ)。 方法 健康雄性Wistar大鼠65只，飼養(yǎng)于18℃-22℃、明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為兩組：模型組(55只)和正常對(duì)照組(10只)。

2、模型組飼以高脂高膽固醇飼料；正常對(duì)照組(簡稱正常組)飼基礎(chǔ)飼料，各組均自由進(jìn)水。8周后，從模型組隨機(jī)抽取5只，10％水合氯醛溶液行腹腔麻醉，取血查血脂，處死取肝臟做病理切片，驗(yàn)證造模是否成功。50只造模成功大鼠，再隨機(jī)分為復(fù)元愈肝膠囊低劑量組、中劑量組、高劑量組(分別簡稱復(fù)低組、復(fù)中組、復(fù)高組；灌胃濃度依次為0.2、0.4、0.8g/ml)及東寶肝泰組(簡稱對(duì)照組；灌胃濃度為90mg/ml)與模型對(duì)照組(簡稱模型組)，每組10只。復(fù)元愈

3、肝膠囊組及東寶肝泰組各以其混懸液按1ml/100g/d灌胃；正常對(duì)照組及模型對(duì)照組各以同等容積蒸餾水灌胃；各組均喂飼基礎(chǔ)飼料，共4周。實(shí)驗(yàn)過程中觀察大鼠一般情況。自實(shí)驗(yàn)正式開始后12周末，于最后1次給藥禁食12h后麻醉狀態(tài)下從眶靜脈采血后處死，迅速按常規(guī)分離血清，剪取部分肝組織，肉眼觀察大鼠肝組織形態(tài)，光鏡下觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)變化；另取部分肝組織，70％乙醇固定，置于0-4℃冰箱待檢。應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀觀察各組動(dòng)物的肝功能(ALT、A

4、ST)、血脂(TG、TC)及血糖(FBS)；應(yīng)用放射免疫法測(cè)定血清胰島素含量，根據(jù)血清胰島素水平(FINS)及空腹血糖(FBS)水平，按照公式計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=(FBS×FINS)/22.5；運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠肝細(xì)胞凋亡，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Bcl-2、Bax基因蛋白表達(dá)。 結(jié)果 1與模型對(duì)照組相比，復(fù)元愈肝膠囊低、中、高劑量組能顯著降低血脂，改善肝功能(P＜0.05)，明顯優(yōu)于東寶肝泰對(duì)照組(P＜

5、0.05)。與正常組比較，模型組的空腹血糖、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)呈增高趨勢(shì)，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。模型對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞凋亡程度明顯高于各用藥組及正常對(duì)照組(P＜0.05)；各用藥組與模型對(duì)照組比較，肝細(xì)胞的凋亡率明顯下降(P＜0.05)，Bcl-2基因蛋白表達(dá)量增高(P＜0.05)，Bax基因蛋白表達(dá)量降低(P＜0.05)。 2一般情況觀察：正常組大鼠毛發(fā)光澤，體態(tài)活潑，反應(yīng)敏捷，食量、排泄物均正常。模型組大鼠

6、毛發(fā)欠光澤，活動(dòng)減少，糞便時(shí)稀軟。各用藥組大鼠毛發(fā)、體態(tài)、反應(yīng)、食量、排泄物基本正常。模型組前2周進(jìn)食量減少，體重增長較正常組稍緩慢，可能與不適應(yīng)高脂飼料有關(guān)。以后各組大鼠體重增長速度接近，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組大鼠體重均無顯著差異(P＞0.05)。 3大鼠肝臟外觀形態(tài)學(xué)變化：正常組大鼠肝臟外觀顏色鮮紅、邊緣銳利、質(zhì)韌；模型組大鼠腹腔脂肪組織明顯增多，肝臟體積明顯增大，包膜緊張，邊緣變鈍，肝外觀呈奶油黃或紅黃相間，質(zhì)地變軟，切面略帶油膩

7、感；復(fù)元愈肝膠囊各用藥組大鼠肝臟色澤、質(zhì)地、外觀接近正常組；東寶肝泰組大鼠肝臟外觀較模型組改變不明顯。 4光鏡觀察大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)變化：正常對(duì)照組大鼠肝小葉清晰，肝細(xì)胞索排列整齊，偶見小泡性脂滴空泡；模型對(duì)照組肝小葉中心帶肝細(xì)胞中出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，以大泡性脂肪滴為主，一些肝細(xì)胞核則被脂肪滴擠得明顯偏位，小葉內(nèi)及匯管區(qū)灶性炎細(xì)胞浸潤，并伴有一定程度的點(diǎn)片狀壞死；復(fù)元愈肝膠囊各劑量組肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞內(nèi)可見少許小泡性