TC-GM抗HBV作用及機(jī)制研究.pdf

1、長(zhǎng)期以來(lái)，乙型肝炎病毒(HBV)一直威脅著人類的健康，如果不能有效地預(yù)防或者治療HBV感染，慢性乙型肝炎最終將發(fā)展為肝硬化，肝細(xì)胞癌(HCC)及肝相關(guān)的并發(fā)癥，從而導(dǎo)致死亡。治療慢性乙型肝炎的關(guān)鍵是抑制HBV DNA的復(fù)制或者抑制成熟HBV顆粒分泌后的持續(xù)性感染，目前用于臨床治療的藥物主要有拉米夫定(3TC)、阿德福韋酯(ADV)、恩替卡韋(ETV)和替比夫定(TBV)等核苷類藥物。它們的作用機(jī)制都是通過(guò)作用于HBV DNA聚合酶來(lái)抑制

2、HBV的復(fù)制，初期能夠取得很好的治療效果，但長(zhǎng)期治療很容易發(fā)生耐藥性突變的現(xiàn)象。因此，尋找高效且不易引發(fā)耐藥的新型抗HBV藥物是新藥研究的主要方向。
　　 病毒是一類嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的極小的微生物，其繁殖必須依賴于宿主細(xì)胞的細(xì)胞器、生理環(huán)境及能量，變細(xì)胞生化機(jī)制為己所用。熱休克蛋白90(Hsp90)是細(xì)胞內(nèi)的分子伴侶，在包括HBV在內(nèi)的多種病毒復(fù)制周期中起到很重要的作用。Hsp90的抑制劑格爾德霉素(GM)可以抑制多種病毒的復(fù)制，

3、具有廣譜的抗病毒作用，由此我們認(rèn)為該蛋白很有可能成為不針對(duì)病毒本身的新靶點(diǎn)。
　　 由于GM本身成藥性差，本論文對(duì)GM的17位進(jìn)行改造，引入核苷結(jié)構(gòu)，將GM與HBV DNA聚合酶抑制劑拉米夫定通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)得到新結(jié)構(gòu)化合物TC-GM。首先測(cè)定了TC-GM對(duì)細(xì)胞和小鼠的毒性，接著測(cè)定TC-GM的抗HBV活性。結(jié)果表明，TC-GM對(duì)細(xì)胞和小鼠的毒性均較格爾德霉素有較大降低，并且對(duì)2.2.15細(xì)胞上清中和細(xì)胞內(nèi)的HBV DNA均具有較好

4、的抑制作用，但抑制作用不如3TC強(qiáng)。
　　 為了研究TC-GM的作用機(jī)制，我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列實(shí)驗(yàn)。首先采用熒光偏振模型檢測(cè)到TC-GM與Hsp90能夠結(jié)合，但結(jié)合能力要弱于GM與Hsp90的結(jié)合;接著分別采用ELISA法和細(xì)胞病變(CPE)法檢測(cè)了TC-GM的抗病毒譜，結(jié)果顯示，TC-GM對(duì)HIV-1、HSV-1和HSV-2、CoxB6等病毒的復(fù)制均具有抑制作用，但抗病毒活性較母體化合物3TC和GM有所降低;還進(jìn)行了初步藥代動(dòng)力學(xué)

5、研究，結(jié)果顯示TC-GM在血液中酯酶作用下容易被水解，酯鍵發(fā)生斷裂生成GM-GABA和3TC，兩者可能各自以不同的抗病毒機(jī)制發(fā)揮作用。
　　 本論文基于從宿主細(xì)胞中尋找抗病毒靶點(diǎn)的理念，通過(guò)對(duì)GM化學(xué)修飾得到全新化合物TC-GM。我們較系統(tǒng)地評(píng)價(jià)了TC-GM的成藥性包括毒性、抗HBV活性、抗病毒譜和初步的藥代動(dòng)力學(xué)。TC-GM在能夠降低毒性的同時(shí)能夠保留抗病毒活性，提高水溶性、光學(xué)穩(wěn)定性。這種藥物設(shè)計(jì)理念能否成為新的抗病毒策略有