HBV對(duì)ANG的體外調(diào)控作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的
　　觀察HBV對(duì)ANG的調(diào)控作用及其機(jī)制，并觀察抑制ANG對(duì)細(xì)胞增殖的影響。
　　研究方法
　　利用HepG2.2.15細(xì)胞模型及質(zhì)粒pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞，通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)ANG mRNA及Elisa，Western Blot檢測(cè)ANG蛋白變化，觀察HBV/HBx對(duì)ANG的調(diào)控作用。通過(guò)Western Blot及Elisa檢測(cè)HBV/HBx對(duì)IL-6的調(diào)控作用，并檢測(cè)

2、IL-6刺激及抗體封閉IL-6活性后ANG細(xì)胞內(nèi)外蛋白含量的變化。Western Blot檢測(cè)HBV/HBx對(duì)HIF-1α的調(diào)控作用，并Western Blot檢測(cè)HIF-1αsiRNA沉默HIF-1α基因后，ANG蛋白表達(dá)的變化。采用免疫熒光方法檢測(cè)HBV對(duì)ANG核轉(zhuǎn)移的影響。通過(guò)ANG siRNA(50nM)轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞及使用ANG核轉(zhuǎn)移抑制劑neomycine，MTT檢測(cè)細(xì)胞抑制率，并檢測(cè)ANG基因沉默后核糖體RN

3、A45S RNA的合成變化。
　　研究結(jié)果
　　Real-time PCR及Elisa，Western Blot結(jié)果顯示在HBV病毒穩(wěn)定復(fù)制的HepG2.2.15細(xì)胞及轉(zhuǎn)染X蛋白的HepG2-HBx細(xì)胞中，ANG mRNA及蛋白水平均高于對(duì)照組。Real-time PCR結(jié)果顯示在HepG2-HBx細(xì)胞中ANG水平升高45SRNA轉(zhuǎn)錄水平升高，ANG基因沉默后其轉(zhuǎn)錄水平降低。Western Blot結(jié)果顯示，HepG2.2.

4、15細(xì)胞及HepG-HBx細(xì)胞中IL-6及HIF-1α蛋白水平均高于對(duì)照組。Real-time PCR及Elisa結(jié)果顯示IL-6刺激后ANG mRNA及蛋白水平均明顯升高，抗體封閉IL-6活性后，ANG蛋白表達(dá)降低。Western Blot及Elisa結(jié)果顯示，HIF-1α基因沉默后，ANG蛋白表達(dá)降低。免疫熒光結(jié)果顯示較于對(duì)照，2215細(xì)胞中核轉(zhuǎn)移明顯被促進(jìn)。MTT結(jié)果顯示，HepG2.2.15細(xì)胞中ANG基因沉默或加入核轉(zhuǎn)移抑制劑