低溫儲存對皮膚β-,1-整合素及相關(guān)蛋白的影響與干預(yù)研究.pdf

1、研究背景及目的：近年來隨著低溫生物醫(yī)學(xué)的發(fā)展，研究者已將目光逐漸從低溫損傷對單細胞的影響轉(zhuǎn)移到組織完整性的破壞上。細胞外基質(zhì)(ECM)作為細胞生存的微環(huán)境，其任何改變都有可能通過細胞膜作用于整個細胞，進而影響其生物學(xué)性狀及功能。對皮膚而言，作為活力較高的基底細胞層部分，其破壞程度將會影響整個皮片組織的活力。研究發(fā)現(xiàn)在皮膚基底細胞膜表面存在著一種重要的膜蛋白受體即β<,1>整合素(β<,1>integrin)，它作為多種細胞外基質(zhì)的受體，

2、通過細胞內(nèi)踝蛋白在介導(dǎo)細胞外基質(zhì)和細胞骨架之間起著橋梁作用，同時對于維持細胞膜完整性及其活性方面可能發(fā)揮著重要意義。本課題旨在研究皮膚組織低溫儲存后細胞外基質(zhì)成分層粘連蛋白(LN)、細胞膜表面分子β<,1>integrin、細胞內(nèi)踝蛋白(talin)的改變，同時繼續(xù)探討海藻糖(trehaIose)作為低溫保護劑的研究，通過其對皮膚低溫損傷的干預(yù)，觀察β<,1>integrin改變，進一步揭示皮膚低溫損傷機制并為完善海藻糖作為低溫保護劑有

3、效成分提供實驗依據(jù)。 方法：在第一部分中采用病人燒傷整形術(shù)后(4小時內(nèi))所余正常皮片，隨機分為4℃組、-20℃組、-80℃組、-196℃組，設(shè)新鮮組為對照組。分別在不同的時間點進行實馬僉觀察，首先通過H．E．染色和免疫組織化學(xué)染色兩種病理方法在光鏡下觀察基底細胞形態(tài)和蛋白的變化，采用Image-Pro5.0圖像分析軟件進行圖像分析，研究指標(biāo)包括βlintegrin、laminin、talin；其次，采用透射電鏡觀察基底膜的變化，

4、并應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測β<,1>integrin基因水平表達規(guī)律。近年來海藻糖抗凍性能在低溫領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，為了明確其對皮膚低溫儲存是否發(fā)揮較傳統(tǒng)保護劑更為優(yōu)勢的作用，從而達到完善皮膚抗凍劑配方的目的，在本實驗第二部分中，繼以往海藻糖對皮膚組織細胞骨架成分保護作用的基礎(chǔ)之上，進一步采用免疫組織化學(xué)方法、RT-PCR方法觀察了海藻糖對細胞膜表面分子β<,1>integrin的作用，并分別應(yīng)用透射電鏡和琥珀酸脫氫

5、酶定量檢測法觀察兩種不同低溫保護劑組合對皮膚基底膜及活力的影響。 結(jié)論：β<,1>integrin、laminin、talin在皮膚低溫損傷中發(fā)生了較為明顯的變化，結(jié)合這三種蛋白與細胞骨架的密切關(guān)系以及既往對細胞骨架在低溫損傷中的研究基礎(chǔ)，可推知β<,1>integrin、laminin、talin可能在參與并介導(dǎo)細胞骨架對皮膚組織的低溫損傷中發(fā)揮著重要的作用。在傳統(tǒng)低溫保護劑中添加海藻糖后，皮膚活力得以提高的原因體現(xiàn)在多方面，