玉紅膏對大鼠創(chuàng)面愈合過程中整合素β-,1-、轉(zhuǎn)錄因子p63影響的實驗研究.pdf

1、目的： 利用大鼠全層皮膚缺損模型，評價玉紅膏的療效，研究其對整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63的影響，探討玉紅膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用機(jī)理。 方法 采用剪去全皮的方法在大鼠背部造成3個直徑為1.8 cm的圓形全層皮膚缺損動物模型，108只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，玉紅膏組、京萬紅(陽性對照)組、模型組，每組36只動物，另設(shè)正常組6只。玉紅膏組造模后立即外敷玉紅膏，每個創(chuàng)面0.1 g；京萬紅組每個創(chuàng)面外敷京萬

2、紅0.1 g，2組均每日定時換藥2次至創(chuàng)面愈合，于造模后第1、3、5、7、14、21天6個時間點觀察記錄創(chuàng)面的愈合情況及愈合時間、測量創(chuàng)面直徑；制備組織切片進(jìn)行HE染色和整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63的免疫組化染色。分別進(jìn)行創(chuàng)面愈合率的計算并用光學(xué)顯微鏡觀察皮膚再生情況；在20倍物鏡下觀察免疫組化染色結(jié)果，利用Image-Pro-P1us圖像分析軟件對整合素β<,1>進(jìn)行OD值分析，對轉(zhuǎn)錄因子p63進(jìn)行陽性細(xì)胞率統(tǒng)計。所有計量數(shù)據(jù)以x

3、 ±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對服從正態(tài)分布的組間計量資料進(jìn)行單因素方差分析。 結(jié)果 ①大體觀察：在創(chuàng)傷后的早期，即造模后第1天，第3天，玉紅膏組創(chuàng)面滲出物較多且濃稠，而京萬紅組和模型組滲出物較少且稀??；愈合過程中肉芽組織生長和再上皮化情況玉紅膏組和京萬紅組無明顯差別，均優(yōu)于模型組。②玉紅膏組、京萬紅組和模型組的創(chuàng)面愈合時間分別為(13.5±0.9)d、(12.6±0.9)d和(19.1±2.6)d，玉紅膏組和

4、京萬紅組的創(chuàng)面愈合時間較模型組明顯縮短，在同一時間點內(nèi)玉紅膏組和京萬紅組的創(chuàng)面愈合率均高于模型組，(P<0.05)。③HE染色結(jié)果顯示，炎癥期的炎細(xì)胞浸潤、增生期的肉芽組織增生、重塑期的膠原排列情況玉紅膏組和京萬紅組無明顯差別，均優(yōu)于模型組。按照組織病理學(xué)評分標(biāo)準(zhǔn)，指標(biāo)膠原纖維束的評價結(jié)果：玉紅膏組和京萬紅組均明顯優(yōu)于模型組(P<0.01)，說明玉紅膏有改善創(chuàng)面愈合質(zhì)量的作用。④整合素β<,1>免疫組化染色圖像分析結(jié)果：從造模第1天起整

5、合素β<,1>OD值開始有明顯的增加，在第1天、第3天、第5天、第7天、第14天5個時間點玉紅膏組、京萬紅組、模型組與正常組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，直至創(chuàng)面完全愈合的第21天3組OD值才與正常組無差別(P>0.05)；玉紅膏組、京萬紅組均是在第7天達(dá)到OD值的峰值，而模型組則延遲至第14天；玉紅膏組和京萬紅組進(jìn)行比較，在創(chuàng)傷后的第7天和第14天2個時間點玉紅膏組的OD值明顯高于京萬紅組(P<0.05)。⑤轉(zhuǎn)錄因子p63免

6、疫組化染色圖像分析結(jié)果：創(chuàng)傷后各時間點創(chuàng)傷皮膚表皮層的轉(zhuǎn)錄因子p63的陽性細(xì)胞數(shù)均高于正常組(P<0.05)；在造模后第1天京萬紅組與模型組差別不明顯，而玉紅膏組與模型組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；玉紅膏組、京萬紅組均是在第7天達(dá)到峰值，而模型組則延遲至第14天：至創(chuàng)面完全愈合的第21天，玉紅膏組、京萬紅組與正常組仍有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。⑥免疫組化染色顯示整合素β<,1>、轉(zhuǎn)錄因子p63在組織中的表達(dá)定位：在正常皮膚，整合

7、素β<,1>陽性細(xì)胞零星分布于表皮基底層，毛囊的外根鞘部；轉(zhuǎn)錄因子p63陽性細(xì)胞廣泛分布于表皮基底層和毛囊及皮脂腺的上皮層。但在創(chuàng)傷皮膚，從傷后第1天開始，隨著時間的推移，整合素β<,1>陽性細(xì)胞的定位分布不僅在上述組織結(jié)構(gòu)中，在表皮層陽性細(xì)胞的分布由正常皮膚那樣零星于表皮基底層，逐漸增加為基底層以及以上的幾層，特征性的改變是棘層或顆粒層出現(xiàn)多個散在的陽性細(xì)胞，且越接近創(chuàng)面這些陽性細(xì)胞更加密集；其數(shù)量隨著創(chuàng)面的縮小逐漸增加再減少，至創(chuàng)面

8、愈合、完全上皮化，這些陽性細(xì)胞仍然存在。轉(zhuǎn)錄因子p63陽性細(xì)胞在表皮層的分布由在基底層的單層分布變?yōu)榧瑢雍皖w粒層也有分布，且越接近創(chuàng)緣陽性細(xì)胞數(shù)越多，在數(shù)量上也是隨著時間的推移逐漸增多再減少的過程，至創(chuàng)面完全愈合。這些陽性細(xì)胞在表皮層的分布也是在基底層及以上的2～3層。光鏡下，2個指標(biāo)模型組在陽性細(xì)胞的數(shù)量及著色強(qiáng)度上均明顯遜于玉紅膏組和京萬紅組。討論由于整合素β<,1>在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中有重要作用，推測玉紅膏和京萬紅通過影響細(xì)胞間信號傳遞來

9、促進(jìn)創(chuàng)面愈合；另外整合素β<,1>還是表皮干細(xì)胞和短暫增殖細(xì)胞的標(biāo)志物，玉紅膏組與模型組的OD值比較差異明顯(P<0.05)，推測玉紅膏有促進(jìn)表皮干細(xì)胞增殖分化的作用。由于轉(zhuǎn)錄因子p63在增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞中表達(dá)，因此統(tǒng)計分析結(jié)果表明玉紅膏組表皮層細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力，提示玉紅膏有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。 結(jié)論 ①玉紅膏具有促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合的能力，能夠提高愈合速度，改善愈合質(zhì)量。②玉紅膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)理可能與整合素β<,1