玉紅膏對大鼠創(chuàng)面愈合過程中整合素β-,1-、轉錄因子p63影響的實驗研究.pdf

1、目的： 利用大鼠全層皮膚缺損模型，評價玉紅膏的療效，研究其對整合素β<,1>、轉錄因子p63的影響，探討玉紅膏促進創(chuàng)面愈合的作用機理。 方法 采用剪去全皮的方法在大鼠背部造成3個直徑為1.8 cm的圓形全層皮膚缺損動物模型，108只健康雄性Wistar大鼠隨機分為3組，玉紅膏組、京萬紅(陽性對照)組、模型組，每組36只動物，另設正常組6只。玉紅膏組造模后立即外敷玉紅膏，每個創(chuàng)面0.1 g；京萬紅組每個創(chuàng)面外敷京萬

2、紅0.1 g，2組均每日定時換藥2次至創(chuàng)面愈合，于造模后第1、3、5、7、14、21天6個時間點觀察記錄創(chuàng)面的愈合情況及愈合時間、測量創(chuàng)面直徑；制備組織切片進行HE染色和整合素β<,1>、轉錄因子p63的免疫組化染色。分別進行創(chuàng)面愈合率的計算并用光學顯微鏡觀察皮膚再生情況；在20倍物鏡下觀察免疫組化染色結果，利用Image-Pro-P1us圖像分析軟件對整合素β<,1>進行OD值分析，對轉錄因子p63進行陽性細胞率統(tǒng)計。所有計量數(shù)據(jù)以x

3、 ±s表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對服從正態(tài)分布的組間計量資料進行單因素方差分析。 結果 ①大體觀察：在創(chuàng)傷后的早期，即造模后第1天，第3天，玉紅膏組創(chuàng)面滲出物較多且濃稠，而京萬紅組和模型組滲出物較少且稀?。挥线^程中肉芽組織生長和再上皮化情況玉紅膏組和京萬紅組無明顯差別，均優(yōu)于模型組。②玉紅膏組、京萬紅組和模型組的創(chuàng)面愈合時間分別為(13.5±0.9)d、(12.6±0.9)d和(19.1±2.6)d，玉紅膏組和

4、京萬紅組的創(chuàng)面愈合時間較模型組明顯縮短，在同一時間點內玉紅膏組和京萬紅組的創(chuàng)面愈合率均高于模型組，(P<0.05)。③HE染色結果顯示，炎癥期的炎細胞浸潤、增生期的肉芽組織增生、重塑期的膠原排列情況玉紅膏組和京萬紅組無明顯差別，均優(yōu)于模型組。按照組織病理學評分標準，指標膠原纖維束的評價結果：玉紅膏組和京萬紅組均明顯優(yōu)于模型組(P<0.01)，說明玉紅膏有改善創(chuàng)面愈合質量的作用。④整合素β<,1>免疫組化染色圖像分析結果：從造模第1天起整

5、合素β<,1>OD值開始有明顯的增加，在第1天、第3天、第5天、第7天、第14天5個時間點玉紅膏組、京萬紅組、模型組與正常組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，直至創(chuàng)面完全愈合的第21天3組OD值才與正常組無差別(P>0.05)；玉紅膏組、京萬紅組均是在第7天達到OD值的峰值，而模型組則延遲至第14天；玉紅膏組和京萬紅組進行比較，在創(chuàng)傷后的第7天和第14天2個時間點玉紅膏組的OD值明顯高于京萬紅組(P<0.05)。⑤轉錄因子p63免

6、疫組化染色圖像分析結果：創(chuàng)傷后各時間點創(chuàng)傷皮膚表皮層的轉錄因子p63的陽性細胞數(shù)均高于正常組(P<0.05)；在造模后第1天京萬紅組與模型組差別不明顯，而玉紅膏組與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；玉紅膏組、京萬紅組均是在第7天達到峰值，而模型組則延遲至第14天：至創(chuàng)面完全愈合的第21天，玉紅膏組、京萬紅組與正常組仍有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。⑥免疫組化染色顯示整合素β<,1>、轉錄因子p63在組織中的表達定位：在正常皮膚，整合

7、素β<,1>陽性細胞零星分布于表皮基底層，毛囊的外根鞘部；轉錄因子p63陽性細胞廣泛分布于表皮基底層和毛囊及皮脂腺的上皮層。但在創(chuàng)傷皮膚，從傷后第1天開始，隨著時間的推移，整合素β<,1>陽性細胞的定位分布不僅在上述組織結構中，在表皮層陽性細胞的分布由正常皮膚那樣零星于表皮基底層，逐漸增加為基底層以及以上的幾層，特征性的改變是棘層或顆粒層出現(xiàn)多個散在的陽性細胞，且越接近創(chuàng)面這些陽性細胞更加密集；其數(shù)量隨著創(chuàng)面的縮小逐漸增加再減少，至創(chuàng)面

8、愈合、完全上皮化，這些陽性細胞仍然存在。轉錄因子p63陽性細胞在表皮層的分布由在基底層的單層分布變?yōu)榧瑢雍皖w粒層也有分布，且越接近創(chuàng)緣陽性細胞數(shù)越多，在數(shù)量上也是隨著時間的推移逐漸增多再減少的過程，至創(chuàng)面完全愈合。這些陽性細胞在表皮層的分布也是在基底層及以上的2～3層。光鏡下，2個指標模型組在陽性細胞的數(shù)量及著色強度上均明顯遜于玉紅膏組和京萬紅組。討論由于整合素β<,1>在信號轉導中有重要作用，推測玉紅膏和京萬紅通過影響細胞間信號傳遞來

9、促進創(chuàng)面愈合；另外整合素β<,1>還是表皮干細胞和短暫增殖細胞的標志物，玉紅膏組與模型組的OD值比較差異明顯(P<0.05)，推測玉紅膏有促進表皮干細胞增殖分化的作用。由于轉錄因子p63在增殖能力強的細胞中表達，因此統(tǒng)計分析結果表明玉紅膏組表皮層細胞具有更強的增殖能力，提示玉紅膏有促進細胞增殖的作用。 結論 ①玉紅膏具有促進皮膚創(chuàng)面愈合的能力，能夠提高愈合速度，改善愈合質量。②玉紅膏促進創(chuàng)面愈合的機理可能與整合素β<,1