GM-CSF對糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合過程中BCL-2表達水平的影響.pdf

1、目的:傷口愈合是一種進化上保守的,復(fù)雜的多細胞的過程。這一過程涉及多種細胞類型,包括角質(zhì)形成細胞,成纖維細胞,內(nèi)皮細胞,巨噬細胞和血小板的協(xié)調(diào)努力。糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。因為糖尿病引起的周圍神經(jīng)性病變、微血管病變是糖尿病患者創(chuàng)面難以愈合的病理基礎(chǔ)。粒細

2、胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)是一個多能生長因子,在傷口愈合的過程中起著重要作用。它能誘導(dǎo)中性粒細胞及單核/巨噬細胞分化、增殖并活化;提高創(chuàng)面抗感染能力;促進壞死組織脫落;加強造血前體細胞增殖;趨化、激活內(nèi)皮細胞、成纖維細胞及角質(zhì)細胞,促進其分化、增殖,使新生血管、肉芽組織形成及上皮細胞遷移、增殖的時間進一步加快;有利于促愈合因子的分泌、創(chuàng)面縮小及組織重塑。這么廣泛的作用引起了國內(nèi)外專家學(xué)者的關(guān)注,他們將GM-CSF應(yīng)用于多種創(chuàng)

3、面,如腫瘤、糖尿病、皮膚病、外科手術(shù)術(shù)后難愈性創(chuàng)面和深度燒傷、靜脈性潰瘍腫瘤的放化療等多種不愈性創(chuàng)面,加快其愈合。因為在創(chuàng)面愈合過程中角質(zhì)形成細胞,成纖維細胞,內(nèi)皮細胞,巨噬細胞和血小板發(fā)揮著及其重要的作用,而GM-CSF在其間起著催化、激活和活化各種細胞的作用,所以我們認為GM-CSF在糖尿病的創(chuàng)面愈合中會起到一定作用。我們通過實驗對糖尿病大鼠模型創(chuàng)面的Bcl-2表達情況來簡單探討一下在糖尿病創(chuàng)面愈合過程中應(yīng)用粒細胞巨噬細胞集落刺激因

4、子的作用。
　　 方法:SPF級大鼠60只,體重(290±15)g,雌雄不限。在高脂高糖環(huán)境下喂養(yǎng)4周后準備造模,造模前禁食12小時,不禁水。STZ用新配制的0.1mmol/L,檸檬酸緩沖液PH=4.2稀釋。一次性腹腔注射STZ小劑量35mg/kg。血糖穩(wěn)定時間約48h-72h。大鼠出現(xiàn)三多癥狀,體重增加。隨即在尾靜脈抽血檢測,血糖值大于11mmol/L以上。取血糖和體重符合標準的大鼠進行胰島病理檢測證明胰島細胞無破壞表明造模成

5、功。隨機抽取造模成功后45只大鼠,先將大鼠腹腔麻醉后背部剃毛,在背部中線兩側(cè)各制作1.5cm×1.5cm創(chuàng)面,創(chuàng)面剪開皮膚全層,至皮下筋膜層,無菌敷料加蓋,每日換料一次。隨機將抽取的45只大鼠分為三組:A組為糖尿病(DM)創(chuàng)面組15只,B組為糖尿病+GM-CSF創(chuàng)面組15只(方法為將大鼠麻醉后,腹腔注入GM-CSF),C組糖尿病+稀釋劑創(chuàng)面組15只(方法為將大鼠麻醉后,腹腔注入稀釋劑)。大鼠每5只分籠飼養(yǎng)。肉眼觀察各組大鼠術(shù)后第3、5、

6、8、12、18天創(chuàng)面組織愈合情況,將大鼠腹腔麻醉后稱重,在尾靜脈抽血檢測血糖值,同時記錄每只大鼠的體重,空腹血糖。利用透明方格紙方法測得第3、5、8、12、18天的創(chuàng)面愈合面積,同時計算創(chuàng)面愈合率。沿愈合創(chuàng)面外緣超出約0.5cm切下創(chuàng)面組織,制片后光鏡觀查創(chuàng)面各類細胞、血管成活情況。進行免疫組化實驗,觀察創(chuàng)面BCL-2和CD34細胞染色的表達情況。
　　 結(jié)果:60只大鼠生存57只,死亡3只,死亡原因考慮為在制作創(chuàng)面時麻藥過量。

7、生存大鼠血糖,體重檢測,8只補符合Ⅱ型糖尿病標準,刪除其記錄數(shù)據(jù)。剩余49只,取其中45只納入研究范圍。肉眼觀察創(chuàng)面愈合結(jié)果:創(chuàng)面形成2天后各組大鼠傷口均開始結(jié)痂。創(chuàng)面形成5天后DM+GM-CSF組較其它3組略有變化,效果不明顯。創(chuàng)面形成7天后從肉眼觀察DM+GM-CSF組較其他3組創(chuàng)面愈合情況較為明顯好轉(zhuǎn)。其愈合情況好壞依次為:DM+GM-CSF組,DM+稀釋液組,糖尿病組。創(chuàng)面形成8天時DM+GM-CSF組創(chuàng)面基本愈合,其他2組略有

8、差別。創(chuàng)面形成18天后DM+GM-CSF組創(chuàng)面全部愈合,其他2組基本愈合,DM組愈合率較前2組差。免疫組化觀察結(jié)果是:BCL-2:DM+GM-CSF組較其它兩組肉芽組織明顯增厚。肉芽組織由大量的成纖維細胞,膠原纖維和毛細血管組成。在DM+稀釋液組的成纖維細胞的胞漿和毛細血管的內(nèi)皮細胞可見大量的BCL-2陽性表達。在糖尿病組中偶可見BCL-2的陽性表達。CD34:DM+GM-CSF組可見大量的棕黃色顆粒染色,同時存在大量的血管。DM+稀釋