EB病毒BARF1原型和變異型基因對鼻咽癌細胞生物學行為的影響.pdf

1、EB病毒BARFl原型和變異型基因對鼻咽癌細胞生物學行為的影響中文摘要背景和目的：EB病毒(EpsteinBarrvirus，EBV)編碼早期基因BARFl是新近確立的EBV致癌基因之一，其轉化作用已在多種細胞系中得到證實。由于BARFl在多數(shù)鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)和EBV相關胃癌組織中表達，推測其可能在NPC、胃癌等上皮細胞性腫瘤的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。我們前期在檢測BARFl基因多態(tài)性時發(fā)現(xiàn)V

2、29A變異型在NPC中的檢出率高于健康人群。本研究旨在探討B(tài)ARFl基因對NPC細胞系腫瘤原性的影響以及BARFl基因變異型對其致癌潛能的影響，為研究BARFl參與NPC的作用及機制提供依據(jù)。方法：構建BARFl基因原型(B958)和變異型(V29A)慢病毒表達載體，分別轉染EBV陰性NPC細胞系CNE，殺稻瘟菌素篩選，RTPCR和qRTPCR鑒定目的基因表達獲得BARFl原型和變異型基因穩(wěn)定轉染細胞。以對照病毒轉染細胞為對照，進行MT

3、T實驗、細胞周期檢測、平板克隆形成實驗、凋亡誘導實驗和細胞遷移實驗，檢測BARFl原型和變異型基因對CNE細胞生物學行為的影響。結果：(1)成功構建BARFl基因原型和變異型基因穩(wěn)定轉染細胞，2種基因在EBV陰性NPC細胞系中均能有效表達。(2)細胞增殖實驗：BARFl原型和變異型基因轉染細胞及對照病毒轉染細胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和細胞周期細胞增殖指數(shù)均無顯著性差異(P均大于O05)。(3)凋亡誘導實驗：順鉑(299／m1)誘

4、導48h，感染BARFl原型和變異型慢病毒細胞的存活率均高于對照病毒感染細胞，差異有顯著性(P均小于005)，而細胞凋亡率低于對照病毒感染細胞，差異有顯著性(P均小于005)，變異型與原型之間細胞存活率和凋亡率均無顯著性差異(P均大于005)。(4)細胞遷移實驗：BARFl原型和變異型慢病毒感染細胞的遷移能力高于對照病毒感染細胞，差異有顯著性(氏005)，變異型與原型之間細胞遷移無顯著性差異(尸005)。結論：(1)BARFl基因對EB

5、V陰性NPC細胞系CNE無明顯促增殖作用，但可提高其抗凋亡能力和遷移能力，從而增強CNE細胞腫瘤原性，在NPC發(fā)生發(fā)展過程中可能起重要作用。(2)BARFlV29A變異型對BARFl致癌潛能無明顯影響。碩士研究生：楊穎(病原生物學)指導老師：羅兵教授關鍵詞：EB病毒；BARFl；鼻咽癌；細胞生物學行為betweenprototypeandvariantBARF1一expressingcellswasnotsignificantincel

6、lviabilityandapoptosisrate(胗005)(4)TheprototypeBARF1一expressingcellsandvariantBARF1expressingcellsledtostrongermigrationcapabilitythanthenonexpressingcells(尸005)Conclusion：(1)BARFlgenehasnosignificanteffectontheprolifera

7、tionofEBVnegativeNPCcelllineCNE，butitcanincreaseitsantiapoptosisandmigrationabilities，suggestingBARF1enhancetheoncogenicabilityinCNEcellsandmayplayimportantrolesinthedevelopmentandprogressofNPC(2)TheV29AvariantofBARF1has