尼洛替尼對多柔比星多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用和心臟毒性的影響.pdf

1、多柔比星（Doxorubicin,DOX）又名阿霉素，為蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，臨床上用于治療白血病、淋巴瘤及各種實體瘤，是臨床一線抗腫瘤藥物。但是原發(fā)性與獲得性多藥耐藥的出現(xiàn)及嚴(yán)重的劑量依賴性心臟毒性極大限制了其臨床應(yīng)用，DOX體內(nèi)劑量累積會引發(fā)多種心肌病，甚至出現(xiàn)充血性心力衰竭，嚴(yán)重時會導(dǎo)致患者死亡。目前已有多種可能心臟毒性機(jī)制被報道，但確切的發(fā)病機(jī)制仍未達(dá)成共識，較為明確的是DOX心臟毒性與其在體內(nèi)的累積量和峰濃度呈依賴性。
　　

2、腫瘤多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)是嚴(yán)重影響DOX治療效果的主要原因。MDR的產(chǎn)生有多種途徑，其中P-糖蛋白（P-Glycoprotein,P-gp）過表達(dá)，增加藥物外排降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度是MDR產(chǎn)生的最主要原因之一。P-gp屬于ABC（ATP-binding cassette）跨膜轉(zhuǎn)運蛋白家族，能夠從細(xì)胞中外排大量結(jié)構(gòu)不同的疏水性、不帶電荷或輕微正電荷的外源性物質(zhì)，在多種腫瘤中高表達(dá)導(dǎo)致多藥耐藥的發(fā)生。<

3、br>　　P-gp在腫瘤組織中高表達(dá)導(dǎo)致MDR的同時，作為人體的主要防御屏障在正常人體很多區(qū)域中也有特異性表達(dá)，發(fā)揮機(jī)體保護(hù)作用。有研究發(fā)現(xiàn)，作為P-gp轉(zhuǎn)運蛋白的底物，DOX在與其他P-gp抑制劑合并用藥時，會增加DOX體內(nèi)暴露水平，增加心臟組織中的濃度，從而增加心臟毒性。體內(nèi)實驗中，利用mdr1a(-/-)KO（多藥耐藥基因敲除）小鼠，給藥后DOX在心肌組織中濃度顯著增高，說明P-gp在DOX心臟組織分布和心臟毒性中起著重要作用。<

4、br>　　尼洛替尼（nilotinib，達(dá)希納），一種小分子靶向酪氨酸激酶抑制劑，臨床用于治療慢性髓細(xì)胞性白血病。前期有研究者發(fā)現(xiàn)尼洛替尼能顯著增強(qiáng)P-gp底物化療藥物的細(xì)胞毒作用，有效逆轉(zhuǎn)P-gp過表達(dá)所導(dǎo)致的MDR。因此，臨床合用尼洛替尼能夠逆轉(zhuǎn) DOX的多藥耐藥，但可能增加DOX的心臟毒性。
　　本研究在皮下耐藥腫瘤模型上評價尼洛替尼對DOX多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用，同時利用HPLC-MS-MS檢測合并用藥后DOX在體內(nèi)組織濃度分

5、布變化，通過生化指標(biāo)與組織病理學(xué)手段評價其心臟毒性。目的在于綜合評價尼洛替尼與DOX合用后藥效與毒性效果，為臨床聯(lián)合化療用藥提供理論基礎(chǔ)。
　　本論文具體內(nèi)容包括以下三個部分：
　　首先，成功建立體內(nèi)耐藥腫瘤模型，皮下接種MG63/DOX耐藥細(xì)胞，成瘤后分組分別給予3mg/kg DOX和生理鹽水，每三天給藥，15天后發(fā)現(xiàn)兩組間腫瘤生長無顯著差異。同時對腫瘤組織進(jìn)行P-gp表達(dá)檢測，結(jié)果表明模型體內(nèi)保持DOX耐藥性，其耐藥的分

6、子學(xué)特性保持穩(wěn)定。
　　其次，考察了聯(lián)合使用尼洛替尼后對DOX在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)及心臟組織內(nèi)的藥物分布和心臟毒性的影響。大鼠體內(nèi)分別給予DOX或聯(lián)合尼洛替尼，在給藥后不同時間點眼眶采血，采用DAS藥動學(xué)軟件中的非房室模型法，來計算藥動學(xué)參數(shù)。72h后將動物處死，取出心臟組織，檢測心臟組織內(nèi)DOX及其主要代謝產(chǎn)物DOXol濃度。結(jié)果顯示，聯(lián)合給予40mg/kg尼洛替尼與單用DOX組相比DOX在體內(nèi)的AUC(0-t)增大到1.

7、24倍，Cmax增加至1.96倍；其主要代謝產(chǎn)物DOXol在體內(nèi)的AUC(0-t)和Cmax分別增加至1.46和1.68倍。聯(lián)合使用40mg/kg尼洛替尼后，DOX在心臟組織內(nèi)的分布降低。生物化學(xué)指標(biāo)和病理學(xué)檢查結(jié)果表明，40mg/kg尼洛替尼能有效抑制DOX所引起的心臟毒性，可能與DOX本身能夠刺激心臟組織內(nèi)P-gp活性與表達(dá)相關(guān)。
　　最后，我們考察了尼洛替尼體外對DOX多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)效果，并探討其作用機(jī)制，在耐藥腫瘤模型體內(nèi)

8、考察了尼洛替尼對DOX耐藥的逆轉(zhuǎn)作用，同時測定了合用尼洛替尼前后，DOX在心臟、肝臟、脾臟、腎臟及腫瘤組織內(nèi)的分布變化。體外實驗結(jié)果表明，尼洛替尼能有效逆轉(zhuǎn)P-gp介導(dǎo)的DOX多藥耐藥，3μM尼洛替尼逆轉(zhuǎn)指數(shù)達(dá)140倍。其逆轉(zhuǎn)機(jī)制為尼洛替尼能夠抑制P-gp外排活性，而不影響其表達(dá)。荷瘤動物體內(nèi)聯(lián)合用藥15天后發(fā)現(xiàn)，單獨給予DOX，尼洛替尼與生理鹽水組相比，三組間腫瘤生長抑制無明顯差異，表明MG63/DOX皮下移植模型在體內(nèi)保持對DOX的

9、耐藥性。聯(lián)合給予60mg/kg尼洛替尼與其他三組相比腫瘤生長呈顯著抑制狀態(tài)，說明體內(nèi)聯(lián)合給予尼洛替尼和DOX能夠逆轉(zhuǎn)阿霉素的耐藥性。同時合用尼洛替尼后，DOX在血清、心臟、肝臟和腫瘤組織中的分布明顯升高，DOXol在血清、心臟、和腫瘤組織中的分布也呈現(xiàn)出相同趨勢。聯(lián)合使用60mg/kg尼洛替尼多次給藥后，LDH和CK與活性水平與單用DOX組相比無顯著變化。病理學(xué)檢測結(jié)果顯示DOX組與DOX合用尼洛替尼組均表現(xiàn)出小鼠組織病理學(xué)損傷形態(tài)。<