輕、中、重度視神經(jīng)挫傷的動物模型制作.pdf

1、目的： 外傷性視神經(jīng)病變(Traumatic optic neuropathy,TON)是顱腦、眼眶和面部外傷嚴(yán)重的并發(fā)癥，傷后視力損害嚴(yán)重，常遺留永久性視力障礙。長期以來，關(guān)于TON的治療一直存在著爭議。研究發(fā)現(xiàn)，損傷程度的差異是決定治療效果的重要因素。而建立規(guī)范可靠、方便易行、可重復(fù)的不同程度量化損傷模型，可為深入研究TON的治療機制提供重要前提。 以往的外傷性視神經(jīng)損傷模型僅是定性損傷或是半定量損傷，而缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)

2、的量化模型。本實驗應(yīng)用三種壓力恒定的血管夾擬造成兔輕、中、重度視神經(jīng)損傷模型，作為視神經(jīng)損傷治療效果評價的動物模型。材料和方法： 1 動物與分組成年健康白兔48只，雌雄兼用，體重2．0-2．5kg，眼部檢查正常。隨機抽取12只，左右眼隨機分為正常對照組和假傷對照組，剩余36只隨機分為損傷Ⅰ組、損傷Ⅱ組、損傷Ⅲ組。 2夾持力和致傷強度測定精確測定和計算血管夾的夾持力和致傷強度(平均沖量)。三種血管夾(小、中、大號)夾持力

3、分別為：32g、98g、148g，平均沖量分別為：397．52g．s/mm<'2>、1209．88g．s/mm<'2>、1549．74g．s/mm<'2>。 3動物模型制作使用小、中、大號三種顯微血管夾夾持三個損傷組動物一側(cè)眼視神經(jīng)各20s，分別造成損傷Ⅰ組、損傷Ⅱ組、損傷Ⅲ組不同程度損傷模型；假傷組僅分離暴露一側(cè)眼視神經(jīng)而不施加夾持；另一眼作為正常對照。 4觀察項目和時間點傷后3d、lw及2w觀察視神經(jīng)損傷局部的組織病

4、理學(xué)改變、進行視神經(jīng)Glee銀染或麗春紅G-亮綠染色后視神經(jīng)纖維及髓鞘積分光密度測定；以及視網(wǎng)膜的形態(tài)學(xué)觀察、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal Ganglion Cell，RGC)計數(shù)、RGC凋亡檢測和RGC凋亡率計算。傷后1h、6h、1d、3d、1w行F-VEP檢查，觀察5組間P<,2>波潛伏期和波幅變化。 5統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)運用單因素方差分析和t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)處理。結(jié)果： 1視神經(jīng)損傷局部的病理學(xué)觀察結(jié)果1

5、.1視神經(jīng)損傷局部的HE染色和組織形態(tài)學(xué)觀察正常組及假傷組視神經(jīng)纖維排列密集規(guī)則，染色均勻，有少量神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。損傷Ⅰ組與正常組相比改變輕微。損傷Ⅱ組3d時視神經(jīng)水腫，軸心區(qū)有梗死灶，膠質(zhì)細(xì)胞排列紊亂，隨時間推移，改變加重。損傷Ⅲ組3d時視神經(jīng)水腫明顯，有多處壞死，隨時間推移，病變迅速發(fā)展，2w時神經(jīng)束結(jié)構(gòu)消失。各時間點損傷Ⅲ組改變較損傷Ⅱ組嚴(yán)重。 1．2視神經(jīng)纖維Glee浸銀染色和積分光密度測定結(jié)果各時間點假傷組視神經(jīng)形態(tài)與正

6、常組基本一致；視神經(jīng)纖維積分光密度與正常組比較，無顯著性差異(P>0.05)。各時間點損傷Ⅰ組視神經(jīng)形態(tài)與正常組相似；視神經(jīng)纖維積分光密度較正常組降低，但無顯著性差異(P>0.05)。損傷Ⅱ組及損傷Ⅲ組3d時視神經(jīng)纖維稀疏扭曲，隨時間推移，改變漸明顯，各時間點損傷Ⅲ組較損傷Ⅱ組改變明顯；兩組在各時間點視神經(jīng)纖維積分光密度均較正常組降低，差異有顯著性(P<0.05)，隨時間推移，視神經(jīng)纖維積分光密度進行性降低。在同一時間點，各損傷組之間視

7、神經(jīng)纖維積分光密度比較，差異有非常顯著性(P<0.01)。 1．3視神經(jīng)切片麗春紅G-亮綠染色和髓鞘積分光密度測定結(jié)果各時間點假傷組視神經(jīng)形態(tài)與正常組基本一致；髓鞘積分光密度與正常組比較，無顯著性差異(P>0.05)。各時間點損傷Ⅰ組視神經(jīng)形態(tài)與正常組相似；髓鞘積分光密度較正常組降低，但無顯著性差異(P>0.05)。損傷Ⅱ組及損傷Ⅲ組3d時有髓鞘脫失，隨時間推移，改變漸明顯，2w時損傷Ⅲ組大量髓鞘崩解，神經(jīng)束結(jié)構(gòu)基本消失，各時間

8、點損傷Ⅲ組較損傷Ⅱ組改變明顯；兩組在各時間點髓鞘積分光密度均較正常組降低，差異有顯著性(P<0.05)，隨時間推移，髓鞘積分光密度進行性降低。在同一時間點，各損傷組之間髓鞘積分光密度比較，差異有非常顯著性(P<0.01)。 2 視網(wǎng)膜的病理學(xué)觀察結(jié)果2.1視網(wǎng)膜HE染色組織形態(tài)學(xué)觀察正常組及假傷組視網(wǎng)膜層次清晰，節(jié)細(xì)胞呈單層排列，整齊密集，胞核清楚，核膜光滑完整。損傷Ⅰ組與正常組相比改變輕微。損傷Ⅱ組3d時RGC出現(xiàn)核固縮，染色

9、加深，數(shù)量減少；隨后視網(wǎng)膜各層變薄，病變隨時間進行性加重。損傷Ⅲ組3d時大量RGC出現(xiàn)核固縮，染色加深，RGC排列明顯稀疏，隨時間進行病變迅速加重。各時間點損傷Ⅲ組較Ⅱ組病變明顯。 2.2 RGC計數(shù)各時間點假傷組RGC數(shù)與正常組比較，無顯著性差異(P>0.05)。各時間點損傷Ⅰ組RGC數(shù)較正常組減少，但無顯著性差異(P>0.05)。各時間點損傷Ⅱ組及Ⅲ組RGC數(shù)與正常組相比，均明顯減少，差異有非常顯著性(P<0.01)，RGC

10、數(shù)隨時間進行性減少。在同一時間點，各損傷組之間RGC數(shù)比較，差異有顯著性(P<0.05)。 2.3：RGC凋亡的檢測和平均凋亡率正常組及假傷組視網(wǎng)膜切片未見凋亡細(xì)胞。各損傷組的凋亡細(xì)胞主要位于GCL。損傷Ⅰ組有少量凋亡細(xì)胞，各時間點RGC凋亡率之間無顯著性差異(P>0.05)。損傷Ⅱ組凋亡細(xì)胞隨時間進行性增多，各時間點RGC凋亡率之間差異有顯著性(P<0.05)。損傷Ⅲ組3d時出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞，RGC凋亡率隨時間進行性增高，各時

11、間點RGC凋亡率之間差異有顯著性(P<0.05)。在同一時間點，各損傷組之間RGC凋亡率有非常顯著性差異(P<0.01)。 3 F-VEP檢測結(jié)果正常白兔P<,2>波潛伏期及波幅分別為(71．72±3．66)ms、(20．53±4．15)μv。各時間點假傷組與正常組的P<,2>波潛伏期和幅值比較，差異無顯著性(P>0．05)。損傷后1h，各損傷組均出現(xiàn)P<,2>波潛伏期延遲，幅值降低，與正常組相比差異均有顯著性(P<0．05)。

12、損傷Ⅰ組1d時P<,2>波潛伏期及幅值基本恢復(fù)正常(P>0．05)。損傷Ⅱ組及損傷Ⅲ組，隨時間推移，P<,2>波潛伏期進行性延遲，幅值進行性降低。結(jié)論 1應(yīng)用壓力為32g、98g、148g的顯微血管夾夾持兔視神經(jīng)20s，可制作穩(wěn)定、可重復(fù)的輕、中、重度視神經(jīng)損傷動物模型。 2輕度損傷組傷后視神經(jīng)形態(tài)學(xué)改變輕微，無顯著病理改變，視神經(jīng)傳導(dǎo)功能良好；中度損傷組傷后視神經(jīng)形態(tài)學(xué)改變明顯，隨時間推移損傷進行性加重，但視神經(jīng)有一