氫飽和生理鹽水對(duì)大鼠視神經(jīng)挫傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究背景
　　視神經(jīng)損傷(opticnerveinjury,ONI)屬于臨床上比較常見(jiàn)的眼外傷類(lèi)型之一。由于視神經(jīng)屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(centernervesystem,CNS)的一部分,損傷后很難再生,因此,視神經(jīng)損傷患者若診斷和治療不及時(shí),往往導(dǎo)致視覺(jué)功能不可逆的減退或者喪失。探討視神經(jīng)損傷的發(fā)病機(jī)制以及如何有效保護(hù)視神經(jīng)也是當(dāng)前神經(jīng)科學(xué)相關(guān)研究的熱點(diǎn)。視神經(jīng)主要由視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinalganglioncells,RG

2、Cs)的軸突匯聚而成。視神經(jīng)損傷后,變性或死亡的RGCs釋放出大量神經(jīng)毒性物質(zhì)和炎性因子,破壞了RGCs生存的內(nèi)環(huán)境,導(dǎo)致正常未受損的RGCs進(jìn)一步變性和凋亡。在這些有害因子中,氧自由基扮演著一個(gè)十分重要的角色。作為機(jī)體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的強(qiáng)氧化劑,它能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)的巰基發(fā)揮氧化作用,使代謝相關(guān)的許多酶失活;同時(shí)可以氧化細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì),從而對(duì)其生物膜的功能造成影響;還能損傷細(xì)胞DNA,最終引導(dǎo)細(xì)胞走向凋亡。在本實(shí)驗(yàn)中,我們采用與臨床外傷性視神經(jīng)

3、損傷情況較為接近的大鼠視神經(jīng)鉗夾傷模型,運(yùn)用視覺(jué)電生理和免疫熒光技術(shù),檢測(cè)氫飽和生理鹽水(hydrogen-richsaline,HRS)治療組與鹽水對(duì)照組大鼠損傷前,以及損傷后不同時(shí)期損傷眼的閃光視覺(jué)誘發(fā)電位(Flashvisualevokedpotentials,F-VEP)以及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)密度的變化,探討氫飽和生理鹽水對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷的保護(hù)作用。
　　目的:
　　建立穩(wěn)定的大鼠視神經(jīng)挫傷(Opticne

4、rvecrush,ONC)模型,觀察大鼠視神經(jīng)損傷前以及損傷后不同時(shí)期內(nèi)閃光視覺(jué)誘發(fā)電位(F-VEP)以及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)密度的變化情況,評(píng)估氫飽和生理鹽水對(duì)大鼠視神經(jīng)挫傷的保護(hù)作用,同時(shí)為氫飽和生理鹽水在治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中的運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:
　　選取健康成年雄性SD大鼠(體重200-250g),在視神經(jīng)球后2mm處用小號(hào)動(dòng)脈阻血鑷夾持視神經(jīng)lOs建立視神經(jīng)挫傷模型。然后將大鼠隨機(jī)分為氫飽和生理鹽水組和對(duì)照

5、組,分別于損傷前和損傷后1、3、5、7、9、11、14天檢測(cè)大鼠損傷眼的閃光視覺(jué)誘發(fā)電位(F-VEP),主要分析P1波的峰時(shí)值和振幅的變化情況。運(yùn)用免疫熒光染色標(biāo)記大鼠的RGCs,觀察視神經(jīng)損傷后3、7、14天RGCs密度的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1.F-VEP結(jié)果顯示:(1)峰時(shí)值的對(duì)比:損傷后第1天,兩組大鼠的P1波峰時(shí)值均明顯延長(zhǎng)(氫飽和生理鹽水組和對(duì)照組大鼠分別為88.61±2.8lms和88.33±1.5lms

6、),同損傷前(分別為72.45±1.47ms和72.44±1.03ms)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。從損傷后第3天起,氫飽和生理鹽水組大鼠的P1波峰時(shí)值縮短為80.28±1.25ms,到損傷后14天一直在該水平范圍波動(dòng),而對(duì)照組大鼠的Pl波峰時(shí)值為88.61±1.20ms,各時(shí)期的氫飽和生理鹽水組大鼠與對(duì)照組大鼠的P1波峰時(shí)值相比明顯縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。(2)振幅的對(duì)比:夾傷前,氫飽和生理鹽水組和對(duì)照組大

7、鼠左眼P1波的振幅分別為7.03±2.25μv和6.77±2.6Iμv,兩組間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。建模成功后ld,兩組大鼠左眼P1波振幅未見(jiàn)明顯改變,分別為6.85±2.26llv和7.09±2.74μv,同夾傷前相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),同時(shí)兩組大鼠P1波振幅相互之間比較也沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。從夾傷后3d到14d之間,兩組大鼠左眼P1波的振幅均在較大范圍波動(dòng),同期的兩組大鼠P1波振幅相互之間比較均沒(méi)有

8、顯著性差異(P>0.05)。
　　2.免疫熒光染色結(jié)果顯示:視神經(jīng)夾傷后,RGCs大量死亡,導(dǎo)致RGCs密度明顯下降,損傷后3天、7天以及14天時(shí)鹽水對(duì)照組RGCs的密度分別為26.61±1.17個(gè)/視野,19.83±1.02個(gè)/視野,14.33±1.17個(gè)/視野,同正常未受損大鼠RGCs密度相比其存活率分別為80％,60%,43%。而氫飽和生理鹽水組大鼠在損傷后3天、7天以及14天時(shí)RGCs的密度分別為29.61±1.34個(gè)/視

9、野,23.44±0.92個(gè)/視野,18.16±1.09個(gè)/視野,分別是正常未受損大鼠RGCs密度的88%,6g%,54%,與同期的鹽水對(duì)照組大鼠RGCs密度相比明顯提高,其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.氫飽和生理鹽水能夠改善大鼠視神經(jīng)挫傷后F-VEP的峰時(shí)值的延長(zhǎng),對(duì)其視覺(jué)傳導(dǎo)功能起到一定的保護(hù)作用。
　　2.氫飽和生理鹽水能夠減緩視神經(jīng)挫傷大鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)的死亡率,可能