飽和氫氣生理鹽水對老齡大鼠腎缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、研究目的：探討飽和氫氣生理鹽水（hydrogen-rich saline）對老齡大鼠腎缺血再灌注損傷(renal ischemia/reperfusion injury,RIRI)的影響并初歨研究其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：將30只20月齡SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham-operated group,SO組）、缺血再灌注組（IR組）、腎缺血再灌注飽和氫氣生理鹽水干預(yù)組（HS組），每組10只共3組。假手術(shù)組接受中線開腹、開腹后切除右

2、腎，左側(cè)腎蒂游離及45分鐘后關(guān)腹操作，術(shù)前6小時(shí)經(jīng)腹腔注射同干預(yù)組等量的生理鹽水；缺血再灌注組大鼠中線開腹，后切除右腎，游離左側(cè)腎動(dòng)脈并用無損傷動(dòng)脈夾鉗夾，阻斷45分鐘后松開動(dòng)脈夾并關(guān)腹，術(shù)前用生理鹽水的量及方法同假手術(shù)組；干預(yù)組大鼠如IR組一樣制成RIRI模型，術(shù)前6小時(shí)經(jīng)腹腔注射飽和氫氣生理鹽水，劑量為5ml/kg。實(shí)驗(yàn)各組均于術(shù)前30min肌注青霉素（1萬u/100g）預(yù)防感染，術(shù)后24小時(shí)處死動(dòng)物，采集大鼠靜脈血檢測血清肌酐（s

3、erum creatinine,Scr）、血清尿素氮（BUN）指標(biāo)評價(jià)腎功能；取左腎采用 HE染色并光鏡觀察各組腎組織的變化；用硫代巴比妥酸法測定腎組織丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量；黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力，用 ELISA方法測定血清8-OHDG水平；用免疫組化法檢測腎組織Caspase-3、HO-1蛋白表達(dá)的變化；利用RT-PCR技術(shù)檢測腎組織中C

4、aspase-3、HO-1 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.BUN和Scr:顯示腎缺血再灌注組和假手術(shù)組之間對腎功能的影響存在差異,IR組BUN(13.81±1.516 mmol/l VS7.383±0.7136 mmol/l)與Scr(189.7±17.17 umol/l VS103.4±10.49 umol/l)偏高（p<0.05），而飽和氫氣生理鹽水組與 IR組比較， BUN(9.729±1.009 mmol

5、/l VS13.81±1.516 mmol/l)與Scr(143.2 umol/l±11.23 umol/l VS189.7±17.17 umol/l)下降（p<0.05），但是氫氣干預(yù)后BUN及Scr水平仍高于假手術(shù)組。
　　2.MDA與 SOD：發(fā)現(xiàn) IR腎組織中 MDA濃度明顯高于 SO組（*P<0.01,1.569±0.1049 nmol/mgprot VS0.7763±0.1323 nmol/mgprot）,氫氣干預(yù)組較

6、缺血再灌注組比MDA值下降（#p<0.01,1.065±0.1290 nmol/mgprot VS1.569±0.1049 nmol/mgprot），但MDA值仍比假手術(shù)組高。SOD含量中，IR組與SO組比較明顯下降（*p<0.01,59.68±7.912 U/mgprot VS101.4±9.902 U/mgprot）而氫氣干預(yù)組與缺血再灌注組比較（P>0.05,93.39±20.99 U/mgprot VS59.68±7.912 U

7、/mgprot）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.8-OHDG:檢測發(fā)現(xiàn)缺血再灌注組8-OHDG水平較假手術(shù)組升高（p<0.01,2.622±0.1842ng/l VS1.832±0.1375 ng/l）,氫氣干預(yù)組與缺血再灌注組相比8-OHDG水平明顯下降（p<0.01,1.645±0.2203ng/l VS2.622±0.1842ng/l）。氫氣水組較假手術(shù)組8-OHDG水平下降。
　　4.光鏡觀察：假手術(shù)組可見部分的腎小球硬

8、化，腎小球基膜增厚，腎小管萎縮；IR組見腎小管擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞水腫、部分上皮細(xì)胞核溶解、管腔內(nèi)可見腎小管上皮細(xì)胞碎片，余觀察同SO組，而H2干預(yù)組腎病理改變較IR組明顯減輕。根據(jù)腎組織損傷評分：氫氣水干預(yù)組與缺血再灌注組相比組織損傷（0.4850±0.08744分VS0.8050±0.1347分） P>0.05;而缺血再灌注組與老齡組假手術(shù)組相比損傷明顯加重（*P<0.05,0.8050±0.1347分 VS0.3988±0.091

9、35分）。
　　5.Caspase-3、HO-1蛋白表達(dá)：各組腎組織中Caspase-3及HO-1免疫組化陽性率情況。Caspase-3陽性率中IR組較SO組相比增加且P<0.05,HS組與IR組相比陽性率下降且P<0.01。而HO-1陽性率測定中，HS組較IR組相比增加且P<0.01。
　　6. Caspase-3、HO-1 mRNA表達(dá):通過檢測腎組織中Caspase-3及HO-1mRNA水平發(fā)現(xiàn)：與假手術(shù)組相比，缺血再

10、灌注組Caspase-3表達(dá)明顯增加（*P<0.05,0.002506±0.0004164 vs0.001343±0.0002327）,氫氣水干預(yù)組與缺血再灌注組相比表達(dá)明顯減低（#P<0.05,0.001433±0.0001845 vs0.002506±0.0004164）;而HO-1mRNA表達(dá)量，與假手術(shù)組相比，缺血再灌注組HO-1mRNA表達(dá)增高但P>0.05無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,氫氣水干預(yù)組與缺血再灌注組相比表達(dá)明顯增加（#P<0.0