飽和氫氣生理鹽水對(duì)大鼠原位肝移植術(shù)后腦保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：只有擁有良好的血液循環(huán)，才能維持機(jī)體各組織與器官的正常代謝，才能維持機(jī)體的功能。組織細(xì)胞發(fā)生缺血性損傷（ischemia injury），是局部組織、器官由于各種原因造成了缺血。隨著學(xué)術(shù)研究和臨床實(shí)驗(yàn)的發(fā)展，研究人員發(fā)現(xiàn)在缺血一定時(shí)間下，重新恢復(fù)供血，普遍會(huì)發(fā)生器官組織功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞。說(shuō)明雖然恢復(fù)了供血，但是原來(lái)缺血的組織和器官功能反而退化了，甚至比缺血前的損傷還要嚴(yán)重。因此將這種血液再灌注后缺血性損傷進(jìn)一步加重的現(xiàn)象稱為

2、缺血再灌注損傷（ischemia-reperfusion injury，IRI）。近年來(lái)，隨著肝移植手術(shù)的大規(guī)模開(kāi)展，人們?cè)絹?lái)越多地重視肝移植手術(shù)的器官保護(hù)問(wèn)題。由于經(jīng)歷缺血與再灌注過(guò)程，不同器官面臨著不同程度的損傷，影響了肝移植患者術(shù)后的遠(yuǎn)期預(yù)后。引起缺血再灌注損傷的機(jī)制，目前考慮與氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡有關(guān)。本研究擬評(píng)價(jià)飽和氫氣生理鹽水對(duì)大鼠原位肝移植術(shù)后急性腦損傷的保護(hù)作用，進(jìn)一步探討自噬參與下腦保護(hù)效應(yīng)的分子機(jī)制。
　　方法：

3、健康成年雄性SD大鼠56只，周齡8~10周，體重220~250g，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為4組,每組8只（n=8）：假手術(shù)組（S組）、肝移植組（OLT組）、飽和氫氣生理鹽水處理組（HS組）及氯喹預(yù)處理組（CQ組）。S組行單純開(kāi)關(guān)腹操作，并游離相應(yīng)血管；OLT組建立大鼠原位肝移植模型，并于無(wú)肝期前5min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射生理鹽水（6ml/kg）；HS組同樣建立大鼠原位肝移植模型，并于無(wú)肝期前5min經(jīng)下腔靜脈緩慢注射飽和氫氣生理鹽水（6ml

4、/kg）；CQ組于模型建立前1h經(jīng)腹腔注射自噬抑制劑氯喹60mg/kg，其它處理同HS組。再灌注后6h通過(guò)組織學(xué)指標(biāo)觀察腦損傷情況；TUNEL染色定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；western blot檢測(cè)自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：與 S組比較，OLT組 MDA升高，SOD降低，細(xì)胞凋亡明顯增加， Caspase-3和cyt c的表達(dá)水平顯著上調(diào)；與OLT組比，HS組MDA水平低，SOD水平高，細(xì)胞凋亡明顯減少，并且Casp

5、ase-3和cyt c的表達(dá)水平顯著降低，與此同時(shí)， p53磷酸化、LC3Ⅱ及beclin-1的表達(dá)明顯上調(diào)；而CQ組應(yīng)用氯喹，抵消了一部分飽和氫氣生理鹽水的作用。OLT組、HS組和CQ組凋亡指數(shù)顯著高于S組，HS組凋亡指數(shù)顯著低于OLT組，而CQ組凋亡指數(shù)明顯高于HS組。
　　結(jié)論：氫，作為一種還原劑，具有抗氧化，抗凋亡的特性。氫的組織保護(hù)作用關(guān)鍵在于中和自由基。與大多數(shù)熟知的抗氧化劑不同，氫的分布有許多特點(diǎn)：它可以穿透生物膜，

6、滲透至細(xì)胞質(zhì)，線粒體和細(xì)胞核。雖然氫的活性屬于中等，但是它快速的氣體擴(kuò)散速度，使它高效地降低細(xì)胞毒性自由基。氫氣可選擇性清除羥自由基（·OH）及過(guò)氧亞硝基（ONOO·），而不與其它具有生理功能的活性氧自由基反應(yīng)。本研究于無(wú)肝期前5min經(jīng)下腔靜脈注射飽和氫氣生理鹽水6ml/kg，結(jié)果表明，其腦組織MDA含量降低，SOD活性升高，大鼠腦組織病理改變得到明顯改善，提示飽和氫氣生理鹽水可以減輕肝移植術(shù)后腦組織氧化應(yīng)激損傷。進(jìn)一步的研究結(jié)果顯示