氫飽和生理鹽水對大鼠重癥急性胰腺炎肺損傷保護(hù)作用及對JNK信號通路調(diào)控的實驗研究.pdf

1、目的:探討靜脈注射氫飽和生理鹽水對?；悄懰徕c誘導(dǎo)的大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷是否具有保護(hù)作用并從JNK信號通路的調(diào)控探討其作用機制。
　　方法:1.氫飽和生理鹽水的制備:利用氫氣發(fā)生器生產(chǎn)高壓氫氣，再將高壓氫氣通入氯化鈉溶液中達(dá)到飽和濃度即可，現(xiàn)制現(xiàn)用。2.大鼠重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷模型的建立及處理:將54只健康SD雄性大鼠隨機分成假手術(shù)組（Sham組）、模型組（SAP+NS組）和氫水處理組（SAP+H2組），各組再分成6

2、h、12h、24h三個時間點，每個時間點6只大鼠。Sham組大鼠開腹翻動胰腺數(shù)次后隨即關(guān)腹，不作其他處理，SAP+NS組和SAP+H2組以5％?；悄懰徕c(1ml/kg)經(jīng)膽胰管開口逆行注入(0.1ml/min)建立模型，在建模成功后1h經(jīng)尾靜脈分別注射等量的生理鹽水或氫飽和生理鹽水(5ml/kg)。各組分別在6h、12h、24h三個時間點處死大鼠，收集血清、肺組織及胰腺組織。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血清TNF-α、IL-1

3、β含量;分光光度計法測定肺組織中髓過氧化物酶(MPO)的活性;熒光定量PCR法檢測肺組織中TNF-α-mRNA、IL-1β-mRNA的表達(dá);Western blot法檢測肺組織中P-JNK蛋白的表達(dá);用肺組織濕干重比，反映肺臟水腫程度;并對胰腺組織、肺組織進(jìn)行HE染色病理學(xué)檢查。以上所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(X)±S）表示，運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析;樣本均數(shù)的比較采用方差分析;兩者的相關(guān)性采用直線相關(guān)和回歸分析，P＜

4、0.05，則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1)SAP+NS組和SAP+H2組血清中TNF-α含量、肺組織中TNF-αmRNA表達(dá)水平、肺組織中P-JNK蛋白的表達(dá)、肺組織濕干重比，在6h、12h、24h各個時間點均高于Sham組(P＜0.05), SAP+H2組與SAP+NS組比較，SAP+H2組在各個時間點均低于SAP+H2組(TNF-α含量:204.1±8.5 VS215.3±6.0, P＜0.05;122.4±10.3 V

5、S263.2±7.4,P＜0.05;84.1±8.6 VS288.0±5.6, P＜0.05。 TNF-α mRNA表達(dá)水平:2.81±0.09 VS3.94±0.20, P＜0.05;2.51±0.11 VS4.40±0.24, P＜0.05;1.77±0.06 VS6.00±0.37, P＜0.05。 P-JNK蛋白的表達(dá):11.29±0.01 VS11.77±0.01, P＜0.05;10.59±0.02VS12.73±0.01,

6、 P＜0.05;9.43±0.01 VS14.12±0.01, P＜0.05。肺組織濕干重比:3.7±0.2VS4.2±0.2, P＜0.05;3.3±0.3 VS4.9±0.2, P＜0.05;3.2±0.2 VS4.6±0.3, P＜0.05。）。(2)SAP+NS組和SAP+H2組血清中IL-1β含量、胰腺和肺組織病理評分、肺組織中MPO活性、肺組織中IL-1β mRNA表達(dá)水平，在6h、12h、24h各個時間點均高于Sham組(

7、P＜0.05), SAP+H2組與SAP+NS組比較，6h時無統(tǒng)計學(xué)差異，在12h、24h時SAP+H2組均低于SAP+NS組(IL-1β含量:80.3±8.3 VS215.4±10.4, P＜0.05;59.3±8.2 VS254.3±8.6, P＜0.05。胰腺和肺組織病理評分:7.5±1.1 VS9.5±0.4, P＜0.05;7.3±0.4 VS9.8±0.3,P＜0.05。4.6±0.2VS5.1±0.2, P＜0.05;3.

8、8±0.3 VS6.3±0.4, P＜0.05。MPO活性:3.3±0.2VS4.7±0.2, P＜0.05;3.1±0.1 VS4.9±0.2, P＜0.05。IL-1β mRNA表達(dá):1.77±0.16 VS1.97±0.11, P＜0.05;1.29±0.03 VS2.92±0.26, P＜0.05)。(3) Person相關(guān)性分析表明肺組織中P-JNK蛋白的表達(dá)與肺組織損傷程度存在相關(guān)性。
　　結(jié)論:1.經(jīng)尾靜脈注射氫飽和