HBV變異、宿主HLA基因多態(tài)及其交互作用與肝細胞癌發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、肝細胞癌是世界范圍內(nèi)癌癥死亡的第二大原因，其發(fā)病率在發(fā)達國家和發(fā)展中國家均呈上升趨勢。HCC的發(fā)生發(fā)展受多個復(fù)雜因素的影響，包括病毒感染、環(huán)境因素以及宿主遺傳變異等。慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是HCC最主要的危險因素。根據(jù)HBV全基因組序列差異大于8％，可將HBV分為不同基因型，另根據(jù)HBV全基因組序列差異介于4％-8％之間，可將HBV分為不同亞型。HBV基因型/亞型存在明顯的地理分布特征，且與臨

2、床疾病結(jié)局、預(yù)后及干擾素治療反應(yīng)等相關(guān)。在東亞，盡管HBV基因型B和C型為流行基因型，但各基因型頻率在該區(qū)域仍有較大差異。大量研究發(fā)現(xiàn)HBV C型與HCC的發(fā)生緊密相關(guān)，然而在以往的研究中，由于研究樣本量相對較小，HBV基因型的低檢測率以及不同的研究設(shè)計，研究結(jié)果中HBV基因型對HBV感染結(jié)局的效應(yīng)也大為不同。另外，HBV基本核心啟動子，很大程度上受增強子Ⅱ調(diào)控，控制著前C區(qū)mRNA的轉(zhuǎn)錄，前C蛋白經(jīng)處理后產(chǎn)生HBV e抗原(HBeAg

3、)，提示病毒復(fù)制活躍，與HCC發(fā)病風(fēng)險增加相關(guān)?？v向研究提示一些位于增強子Ⅱ/基本核心啟動子/前C區(qū)（EnhⅡ/BCP/PC）的突變在HCC診斷前的數(shù)年即開始發(fā)生并在HCC的發(fā)生發(fā)展中逐漸累積，該區(qū)突變常伴有重要的生物學(xué)活性改變。宿主遺傳因素在HCC的發(fā)生中同樣扮演著重要角色。多個研究發(fā)現(xiàn)位于染色體6p21區(qū)域的人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)Ⅱ類分子上可能存在HCC易感位點。我國HCC全基因組關(guān)

4、聯(lián)研究(genome-wide associationstudies，GWAS)起步較早，目前開展的三項HBV相關(guān)的HCC GWAS均來源于中國人群，其中二項GWAS一致發(fā)現(xiàn)HLA-DQ/DR遺傳變異與HBV陽性的HCC(HBV-HCC)易感性相關(guān)。在這兩項獨立的GWAS中，第一項研究分析了1，538例HBV-HCC患者和1，465例慢性HBV感染者的GWAS芯片結(jié)果，最終發(fā)現(xiàn)了位于HLA-DQA1和HLA-DRB1之間的HCC易感位點

5、rs9272105。另一項研究分析了1，161例HBV-HCC患者及1，353例對照的GWAS芯片結(jié)果，最終發(fā)現(xiàn)了位于HLA-DQ的HCC易感位點rs9275319。這些結(jié)果提示HLA-DQ/DR分子在HCC的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。HBV變異很可能在炎性微環(huán)境下受病毒-宿主免疫壓力相互作用而產(chǎn)生。因此，我們開展了一項大型多中心病例對照研究來探討HBV基因型、EnhⅡ/BCP/PC區(qū)域的突變、GWAS識別的HLA-DQ/DR單核苷酸多態(tài)

6、性(single nucleotidepolymorphisms，SNPs)（rs9272105和rs9275319）及其交互作用與HCC發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)，進而評估了這些因素對于HBV-HCC發(fā)病風(fēng)險的預(yù)測效應(yīng)。
　　本研究采用大樣本多中心的病例對照研究設(shè)計，包括來自于江蘇省中部和南部地區(qū)的1，507例HBV-HCC患者和1，560例HBV持續(xù)感染者，病例對照在區(qū)域、年齡和性別上進行了頻數(shù)匹配。HBV-HCC患者中，535例來自南京

7、，522例來自南通，450例來自啟東;HBV持續(xù)感染者中，510例來自張家港，500例來自泰興，550例來自丹陽。應(yīng)用基于HBV型別特異性引物的巢式多重PCR檢測HBV基因型A-F和亞型B1、B2、C1、C2，并采用巢式PCR和測序檢測HBV EnhⅡ/BCP/PC區(qū)域的突變。此外，應(yīng)用TaqMan基因分型方法檢測并分析了HLA SNPs rs9272105和rs9275319與HCC發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)。進而構(gòu)建HCC發(fā)病風(fēng)險預(yù)測模型，將H

8、BV基因型、與HCC發(fā)病風(fēng)險獨立相關(guān)的HBV突變、HLA SNPs(rs9272105和rs9275319)、HCC相關(guān)的相乘交互作用及交互作用的主效應(yīng)作為候選預(yù)測因子，并構(gòu)建逐步回歸模型;采用受試者工作特征曲線(receiver-operator characteristic，ROC)來評估所構(gòu)建的預(yù)測模型在HCC發(fā)生風(fēng)險預(yù)測中的應(yīng)用價值。發(fā)現(xiàn)各地區(qū)間HBV基因型B型和BC型的分布差異較大，但三個地區(qū)病例中HBV C型所占比例均明顯高

9、于對照組(所有病例vs.對照:80.6％ vs.34.4％)。與感染HBV B-相關(guān)基因型（B型和BC型）的個體相比，感染HBV非-B基因型（C型和D型）的個體發(fā)生HCC的風(fēng)險增加了7.18倍(調(diào)整OR=8.18，95％ CI=6.91-9.68)。此外，HBV EnhⅡ/BCP/PC區(qū)域的11個熱點突變C1653T、 C1673T、T1674C/G、C1730G、A1752G、T1753C、A1762T、G1764A、G1899A、G

10、1915A/C和C1969T與HCC發(fā)病風(fēng)險的增加或降低顯著相關(guān)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，rs9272105的A等位基因能夠顯著增加HBV持續(xù)感染者發(fā)生HCC的風(fēng)險（調(diào)整OR=1.31，95％CI=1.18-1.45）;而rs9275319的G等位基因能夠顯著降低HBV持續(xù)感染者發(fā)生HCC的風(fēng)險(調(diào)整OR=0.66，95％CI=0.56-0.78)。通過交互作用分析，我們發(fā)現(xiàn)rs9272105與HBV基因型之間存在顯著的相乘交

11、互作用。進一步的叉生分析提示，相對于攜帶rs9272105GG基因型的HBV B-相關(guān)基因型感染者，攜帶AA基因型的HBV非-B基因型感染者發(fā)生HCC的風(fēng)險增加了16.70倍（調(diào)整OR=17.70，95％CI=12.21-25.64）。我們還發(fā)現(xiàn)rs9272105與HBV突變C1673T、G1719T、A1726C、C1730G、A1752G和G1799C之間也存在顯著的相乘交互作用。然而，我們并沒有發(fā)現(xiàn)rs9275319與HBV基因型

12、或突變間存在顯著的相乘交互作用。通過逐步回歸分析，HBV基因型、上述11個與HCC發(fā)病風(fēng)險獨立相關(guān)的HBV突變、HLA SNPs（rs9272105和rs9275319）以及rs9272105與A1752G的交互作用最終進入了HCC風(fēng)險預(yù)測模型。包含HLA-DQ/DR SNPs、HBV基因型和突變的HCC風(fēng)險預(yù)測模型，其曲線下面積(area under the curve，AUC)為0.840，靈敏度為81.3％，特異度為74.8％。在

13、這次多中心大樣本的研究中，我們發(fā)現(xiàn)HBV基因型C型和亞型C2型是HCC的危險因素，且11個HBV突變與HCC的發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)。另外，還發(fā)現(xiàn)HLA-DQ/DR rs9272105與HBV基因型和突變在HCC的發(fā)生中均存在顯著交互作用，提示rs9272105可能具有潛在的生物學(xué)意義。更有意義的是，包含HLA-DQ/DR SNPs、HBV基因型和突變的HCC風(fēng)險預(yù)測模型在鑒別HCC患者和對照上具有較高的靈敏度和特異度。因此，HBV基因型、突