脊神經(jīng)根離斷對大鼠燙傷創(chuàng)面愈合速度、愈合質(zhì)量及神經(jīng)再生的影響.pdf

1、背景：燒傷創(chuàng)面愈合是一個復(fù)雜而有序的生物學(xué)過程，包括炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖、創(chuàng)面重塑幾個階段。關(guān)于創(chuàng)面愈合涉及的炎癥細(xì)胞、修復(fù)細(xì)胞、炎癥介質(zhì)、生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)等成分的研究已有大量報道。既往研究證明神經(jīng)在創(chuàng)傷愈合過程中起著非常重要的作用，研究焦點多集中在神經(jīng)纖維分泌的神經(jīng)肽上和創(chuàng)面愈合速度，而神經(jīng)肽的分泌受多種內(nèi)分泌因素的影響，不能確切證明神經(jīng)與創(chuàng)面愈合之間的關(guān)系；但有關(guān)創(chuàng)面愈合過程中再生神經(jīng)的形態(tài)學(xué)及其三維結(jié)構(gòu)、神經(jīng)調(diào)節(jié)與創(chuàng)面愈合質(zhì)量形

2、成之間的關(guān)系鮮有報道。
　　 目的：我們擬通過動物實驗觀察去除神經(jīng)因素后，創(chuàng)面愈合速度和創(chuàng)面愈合質(zhì)量的的變化情況，初步確定皮膚神經(jīng)對燙傷創(chuàng)面愈合作用；同時觀察燒傷創(chuàng)面愈合過程中的神經(jīng)變化情況，總結(jié)創(chuàng)面愈合過程中神經(jīng)纖維的變化規(guī)律及其可能作用，從而初步探明神經(jīng)與創(chuàng)面愈合的相互作用，為神經(jīng)調(diào)控對創(chuàng)面愈合影響提供新的依據(jù)，同時我們在實驗過程中探索一種可靠的失神經(jīng)支配皮膚模型制作方法。
　　 方法：將30只大鼠右側(cè)T9-L1階段

3、脊神經(jīng)根切斷，制作失神經(jīng)支配皮膚模型；然后在大鼠背部右側(cè)失神經(jīng)支配皮膚區(qū)域制作直徑4cm的深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面，設(shè)為實驗組，左側(cè)對稱正常皮膚制作同樣的創(chuàng)面，設(shè)為對照組，傷后連續(xù)觀察創(chuàng)面變化，于7，14，21d采用隨機數(shù)字表選取10只大鼠，麻醉后切取實驗組和對照組傷區(qū)組織標(biāo)本各10份，每一份標(biāo)本分為兩部分，一部分4％中性甲醛固定后，脫水包埋成蠟塊，另一部分-80℃冰箱冷凍保存。石蠟包埋組織切片后采用改良三色染色法和免疫組織化學(xué)法觀察Ⅰ和Ⅲ膠原分

4、泌情況，血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的變化，并計算Ⅰ/Ⅱ型膠原比例的變化，探討創(chuàng)面愈合速度及愈合質(zhì)量。-80℃冰箱冷凍保存的標(biāo)本采用冰凍切片技術(shù)，利用蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)進行熒光免疫組織化學(xué)染色，其中一塊5μm厚用普通熒光顯微鏡觀察再生神經(jīng)的平面結(jié)構(gòu)及其數(shù)量變化，一塊15μm厚采用激光共聚焦顯微鏡觀察神經(jīng)三維結(jié)構(gòu)。蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP9.5)是一種泛素水解酶，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)組織中表達的神經(jīng)細(xì)胞分化的各個階段，是一個已

5、知的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物，通過PGP9.5對神經(jīng)染色，明確創(chuàng)面愈合過程中神經(jīng)分布的變化。
　　 結(jié)果：(1)實驗組Ⅰ，Ⅲ型膠原分泌和Ⅰ/Ⅲ型膠原比值于傷后各時間點均顯著低于對照組(P＜0.05)。實驗組：Ⅰ型膠原分泌在傷后7天、14天、21天逐漸增加(P＜0.05)，Ⅲ型膠原在傷后7天、14天無明顯差異，至傷后21d時分泌顯著增高(P＜0.05)，Ⅰ/Ⅲ型膠原比值與傷后21d時明顯降低(P＜0.05)；(2)VEGF變化：兩組在傷后

6、VEGF均開始升高，實驗組升高緩慢，至傷后14天達到高峰，傷后21天維持在較高水平；對照組則迅速升高，傷后7天即達高峰，傷后14天開始緩慢下降，至傷后21變化相對穩(wěn)定，維持在較高水平。傷后7天、14天兩組VEGF表達兩組間比較有顯著差異(p＜0.05)，傷后21天兩組間比較無顯著差異(p＞0.05)；(3)神經(jīng)再生變化：傷后7天，實驗組PGP9.5陽性的信號較弱，對照組在傷區(qū)基底部可見PGP9.5免疫陽性染色，兩組NVF沒有顯著差異(p

7、＞0.05)；傷后14天，實驗組切片仍未見免疫陽性染色區(qū)域，對照組PGP9.5免疫陽性染色區(qū)域開始增多，主要分布在基底部和組織中部，一般為圓點、短棒狀，對照組NVF顯著高于實驗組組(p＜0.05)；傷后21天，對照組組PGP9.5免疫陽性染色區(qū)域明顯增多，呈圓點、短棒或者豆芽狀，在組織各層都有PGP9.5免疫陽性區(qū)域，對照組NVF顯著高于實驗組組(p＜0.05)，本實驗中利用LSCM對神經(jīng)進行三維重建，僅在對照組傷后21天取得理想效果，