香煙煙霧提取物對人內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和IL-8表達(dá)以及與PMN黏附的影響.pdf

1、目的：探討香煙煙霧提取物(CSE)對人內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-I)和白介素-8(IL-8)表達(dá)以及內(nèi)皮細(xì)胞與多形核中性粒細(xì)胞(PMN)黏附的影響。 方法：復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(ECV-304)，獲得足夠的實驗用內(nèi)皮細(xì)胞。按照Yunchao Su的方法并改良：連續(xù)抽吸燃著的兩支去過濾嘴香煙煙霧，將煙霧溶解在20mlPBS溶劑中，消毒過濾制備成CSE原液，用無血清DMEM培養(yǎng)基稀釋后用于實驗。將ECV-30

2、4種植在預(yù)埋了蓋玻片的24孔培養(yǎng)板中，等細(xì)胞爬片后，收集(0％、2.5％、5％、10％)CSE干預(yù)12小時后和用10％CSE干預(yù)不同時間點(Oh、3h、6h、9h、12h)后的細(xì)胞標(biāo)本，采用細(xì)胞免疫化學(xué)染色法檢測內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-l的表達(dá)，表達(dá)結(jié)果用目測積分法進(jìn)行半定量分析。用不同濃度(2.5％、5％、10％)CSE刺激培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，預(yù)定時間點(Oh、1h、3h、6h、9h、12h、24h、48h)后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，酶聯(lián)免疫吸附

3、測定(ELISA)法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液的IL-8濃度。用Ficoll密度梯度離心法，從正常健康人血中分離多形核中性粒細(xì)胞(PMN)；不同濃度(0％、2.5％、5％、10％)CSE干預(yù)ECV-304 12小時后以及10％CSE干預(yù)不同時間點(Oh、lh、3h、6h、9h、12h)后，加入分離出來的正常人血PMN，孵育(于飽和濕度、37℃、含5％CO<,2>培養(yǎng)箱中)60分鐘后，采用細(xì)胞記數(shù)法來測定(PMN-EC)的黏附率。最后的數(shù)據(jù)用SP

4、SSl3.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以；±S表示，多組間均數(shù)比較采用One—Way ANOVA分析，兩兩比較采用LSD-T檢驗，取α=0.05，以雙側(cè)P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1、ICAM-1的表達(dá)：無CSE干預(yù)組、2.5％CSE干預(yù)組、5％CSE干預(yù)組、10％CSE干預(yù)組12小時后ICAM-1在EC上的表達(dá)量分別為0.3±0.5、6.3±0.4、6.4±0.5、7.9±0.3，與對照組比較，各干預(yù)組IC

5、AM-1表達(dá)量均增高，且具有統(tǒng)計學(xué)差異(P均<0.01)；各干預(yù)組之間比較，隨著干預(yù)濃度的增加，ICAM-1的表達(dá)量增高，除了2.5％CSE干預(yù)組和5％CSE干預(yù)組之間無統(tǒng)計學(xué)差異外(P>0.05)，各組之間相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)；10％CSE干預(yù)(0h、3h、6h、9h、12h)后ICAM-1在EC上的表達(dá)量分別為0.3±0.5、5.1±0.3、6.5±0.5、7.0±0.7、7.9±0.3，隨著干預(yù)時間的延長，ICAM-

6、1的表達(dá)量增加，各時間組之間相比均有統(tǒng)計學(xué)差異(P均<0.05)。 2、IL-8的表達(dá)：無CSE干預(yù)組、2.5％CSE干預(yù)組、5％CSE干預(yù)組、10％CSE干預(yù)1小時后IL-8的濃度分別是：(13.6±1.1)、(330.9±15.912)、(474.7±12.018)、(535.1±14.358)pg／ml(P<0.01)，內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)IL-8的含量隨干預(yù)濃度增加而增加。10％CSE干預(yù)(Oh、1h、3h、6h、9h、12h、