E-selectin和ICAM-1在肝癌細胞和內(nèi)皮細胞黏附作用中的實驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC，以下簡稱肝癌）是世界范圍內(nèi)發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，每年約有100萬以上的人新患此病，它也是我國最常見且惡性程度較高的腫瘤之一。手術(shù)切除是當前治療原發(fā)性肝癌的首選方法，然而肝癌根治術(shù)后的高復發(fā)轉(zhuǎn)移率卻是阻礙肝癌遠期療效的重要因素。肝癌復發(fā)轉(zhuǎn)移多發(fā)生在術(shù)后1-2年，有資料表明，肝癌術(shù)后1年復發(fā)率達20%-64%；3年復發(fā)率可高達57%-81%；湯釗猷[2]等報道肝癌切除術(shù)后5年

2、復發(fā)率為61.5%，小肝癌的術(shù)后復發(fā)率為43.5%。因此，深入研究原發(fā)性肝癌復發(fā)與轉(zhuǎn)移的機制，并尋求有效抑制復發(fā)與轉(zhuǎn)移的治療措施已成為當今肝癌研究中的重點和難點。 腫瘤細胞與血管內(nèi)皮細胞之間的粘附是腫瘤復發(fā)與轉(zhuǎn)移的決定性步驟之一，其間細胞粘附分子（cellular adhesion molecule，CAM）的表達起著極為重要的作用。腫瘤細胞與內(nèi)皮細胞之間的粘附是通過粘附分子所介導，內(nèi)皮細胞選擇素（E-selectin）是粘附分

3、子選擇素家族中的一員，可在激活的血管內(nèi)皮細胞上表達，目前研究發(fā)現(xiàn)其配體路易斯寡糖-X（sialyl-Lewis X，sleX）和路易斯寡糖-A（（sialyl-Lewis A，sleA）強表達于結(jié)腸癌、乳腺癌、胃癌等多種腫瘤細胞表面，并已證實E-selectin通過與其配體特異性的結(jié)合在多種腫瘤的轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用，甚至可以作為判斷腫瘤預后的一個特異性指標；同時阻斷E-selectin的活性及表達的藥物可以阻斷腫瘤的轉(zhuǎn)移，也有研究證實肝癌

4、細胞表面大量表達E-selectin配體sleX和sleA。 細胞間粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是免疫蛋白超家族粘附分子之一，是目前研究較多的粘附分子，它廣泛表達于單核細胞、淋巴細胞、血管內(nèi)皮細胞和人體癌細胞表面[8]，參與許多生理和病理過程中細胞間信號的傳導，包括腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和生長。ICAM-1的天然配體為淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1（leucocyte fun

5、ction-associated antigen-1，LFA-1）。腫瘤細胞ICAM-1的表達升高，一方面能促進血管生成，有利于腫瘤細胞的生長，另一方面可以使淋巴細胞及自然殺傷細胞識別癌細胞的能力降低，參與腫瘤逃避免疫監(jiān)視。血清可溶性細胞間粘附分子-1（soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1）亦可通過促進腫瘤血管的生成和逃避機體的免疫監(jiān)視作用，而在腫瘤生長中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)

6、，大腸癌細胞表面ICAM-1的過度表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。白血病細胞表面ICAM-1的表達與其向血管外滲出和疾病進展有關(guān)，抗ICAM-1 mAb可抑制這種滲出。胃癌細胞表面高表達ICAM-1分子，其產(chǎn)生的sICAM-1可促進癌細胞的血源性轉(zhuǎn)移[10]。原發(fā)性肝癌患者血清sICAM-1水平在一定程度上可以反映肝癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移情況及治療效果，有可能成為預測肝癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移及療效的指標。孫婧景等的研究[11，12，13]表明ICAM-1的高表達

7、與肝癌高轉(zhuǎn)移特性有關(guān)，抗粘附治療可能是防治腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移的一個新方向。 依據(jù)以上特點，我們設想：肝癌細胞可能通過分泌促進E-selectin和ICAM-1等粘附分子表達的物質(zhì)激活血管內(nèi)皮細胞，而激活的血管內(nèi)皮細胞通過E-selectin和ICAM-1等粘附分子與其配體sleX或sleA和LFA-1等發(fā)生特異性結(jié)合，使肝癌細胞和內(nèi)皮細胞粘附，最終導致肝癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此通過阻斷E-selectin和ICAM-1等粘附分子的表達可能抑

8、制肝癌細胞和內(nèi)皮細胞的粘附，從而有望達到阻斷肝癌復發(fā)與轉(zhuǎn)移的目的。 目的： 研究E-selectin和ICAM-1在肝靜脈內(nèi)皮細胞ED25和臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV304上的表達，探討E-selectin和ICAM-1在肝癌細胞和內(nèi)皮細胞黏附中的作用，并篩選有臨床應用前景的、預防肝癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的抗黏附藥物。 方法： 實時熒光定量PCR檢測E-selectin和ICAM-1在肝靜脈內(nèi)皮細胞ED25和臍靜脈內(nèi)皮細胞

9、ECV304上的表達，應用體外粘附實驗檢測肝癌細胞HepG2與活化的ED25和ECV304的粘附，最后粘附阻斷實驗測試不同藥物對肝癌細胞與肝靜脈內(nèi)皮細胞粘附阻斷的作用。 結(jié)果： E-selectin和ICAM-1高表達于活化后的ED25和ECV304，且能介導HepG2與ED25和ECV304的粘附。地塞米松、丹參酮ⅡA在黏附阻斷實驗設定的濃度下對ED25和HepG2均無細胞毒作用，地塞米松、丹參酮ⅡA具有較強的抗黏附