E-selectin在大腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及Cimetidine抑制E-selectin表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 探討E-selectin及其配體sLex在大腸癌LOVO細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304早期粘附中的作用；了解西咪替丁(Cimetidine)處理血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304后表面E-selectin表達(dá)的變化，為腫瘤的抗粘附治療提供理論依據(jù)。 方法： 1.采用免疫組化SP法(鏈霉素親和生物素蛋白-過(guò)氧化物酶法)觀察E-選擇素在內(nèi)皮細(xì)胞ECV304中的表達(dá)。 2.活性染料玫瑰紅攝入法觀察E-select

2、in及其配體sLex在大腸癌LOVO細(xì)胞與TNF-a激活內(nèi)皮細(xì)胞ECV304早期粘附中的作用。 3.活性染料玫瑰紅攝入法檢測(cè)Cimetidine對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304早期粘附的影響。 4.細(xì)胞ELISA法和細(xì)胞流式間接熒光抗體標(biāo)記法檢測(cè)不同濃度Cimetidine處理的血管內(nèi)皮ECV304細(xì)胞表面E-selectin表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1.E-選擇素陽(yáng)性表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV3

3、04細(xì)胞漿內(nèi)。 2.當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304被TNF-a激活后，其與LOVO細(xì)胞間的粘附較激活前明顯增加，且這種作用具有TNF-a濃度及時(shí)間依賴性；用不同濃度的抗E-selectin單抗處理血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304a或用其配體sLex單抗處理腫瘤LOVO細(xì)胞后，隨著E-selectin單抗、sLex單抗?jié)舛鹊脑黾?，?xì)胞相對(duì)粘附率逐漸降低，阻斷率逐漸增加。 3.血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304經(jīng)不同濃度Cimetidine處理后

4、，腫瘤LOVO細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞ECV304間的粘附率隨Cimetidine劑量的增加逐漸下降，E-selectin的表達(dá)亦減少。 結(jié)論： 1.E-selectin單抗、sLex單抗可阻斷大腸癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞間的粘附，表明E-selectin和其配體sLex是介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞與大腸癌LOVO細(xì)胞粘附反應(yīng)的主要早期粘附分子。 2.Cimetidine可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞表面E-selectin的表達(dá)，從而抑制大腸