回乳抑增一號(hào)處方優(yōu)化及其作用機(jī)制初步研究.pdf

1、本研究通過(guò)現(xiàn)代藥理學(xué)研究方法，制備動(dòng)物模型，通過(guò)觀察回乳抑增一號(hào)不同組方對(duì)乳腺增生癥和高泌乳素血癥兩種模型大鼠的治療作用，篩選出最優(yōu)處方，為后期將其開(kāi)發(fā)成醫(yī)院制劑提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，本文通過(guò)制備同時(shí)具有乳腺增生癥伴高泌乳素血癥的兩種疾病動(dòng)物模型，探尋乳腺增生癥與高泌乳素血癥這兩種疾病間的關(guān)系，初步研究回乳抑增一號(hào)治療這兩種疾病的作用機(jī)制。
　　方法：
　　按中醫(yī)“君、臣、佐、使”的拆方原則，結(jié)合各自的溫?zé)岷疀鰧傩院退幮?/p>

2、，對(duì)組方進(jìn)行拆方分組。
　　選用雌性未孕性成熟 Wistar大鼠，i.m.苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg，連續(xù)25天，i.m.黃體酮注射液0.5mg/kg，連續(xù)5天，造成乳腺增生癥模型。隨機(jī)分為15個(gè)組，每組8只：全方組；君藥組；臣+佐；君+臣；君+臣1；君+臣2；君+臣1+佐1；君+臣1+佐2；君+臣2+佐1；君+臣2+佐2；生麥芽組；不含生麥芽組；正常組；模型組；不給藥組。各組于造模后按體重給藥，劑量為每天5mg/kg，正

3、常組和模型組給等體積的生理鹽水，連續(xù)30天。末次給藥24h后，于次日釆用眼眶靜脈取血的方法，取血2ml，按酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中E2、P、PRL、FSH、LH的含量；取各組大鼠第二對(duì)乳房，HE染色后，觀察各組大鼠乳腺增生情況。
　　選用雌性未孕性成熟 Wistar大鼠，除正常組大鼠外，其它組大鼠背部i.h.鹽酸甲氧氯普胺注射液1.5ml，連續(xù)10天，造成高泌乳素血癥大鼠模型。隨機(jī)分為8組，每組8只：全方組；優(yōu)化方組；君+臣2+佐

4、1；君+臣1+佐1；君+臣2+佐2；空白模型組(不給藥30d后)，正常組。各組于造模后按體重給藥，劑量為每天5mg/kg，正常組和模型組給等體積的生理鹽水，連續(xù)30天。末次給藥24h后，釆用眼眶靜脈取血的方法，取血2ml，按酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中E2、P、PRL、FSH、LH的含量。
　　以回乳抑增一號(hào)中各味藥材的主要有效成迷迭香酸、大麥芽堿、芥子堿硫氰酸鹽、哈巴俄苷、丹酚酸B以及丹參酮ⅡA作為對(duì)照成分，針對(duì)拆方中各成分的含量進(jìn)

5、行比較研究。
　　選用雌性未孕性成熟Wistar大鼠，隨機(jī)分為3組，每組10只：正常組、模型方法A組、模型方法B組。模型A組大鼠i.m.苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg，連續(xù)25天，繼而i.m.黃體酮注射液0.5mg/kg，連續(xù)5天，然后i.h.鹽酸甲氧氯普胺每只1.5ml，連續(xù)10天。模型B組大鼠i.h.鹽酸甲氧氯普胺每只1.5ml，連續(xù)10天，i.m.苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg，連續(xù)25天，i.m.黃體酮注射液0.5

6、mg/kg，連續(xù)5天。在給藥后第0天，第7天，第14天，第30天，各組大鼠采用眼眶靜脈取血的方法，取血2ml，按酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中E2、P、PRL的含量；取各組大鼠第二對(duì)乳房，HE染色后，觀察乳腺增生情況。應(yīng)用PCR及Western Blot技術(shù)檢測(cè)血清中中PRL、ER、PR受體蛋與基因的表達(dá)。
　　選用雌性未孕性成熟Wistar大鼠，隨機(jī)分為7組(n=8)：全方組、優(yōu)化方組、溴隱亭組、乳癖散結(jié)組、正常組、模型組、空白模型組

7、。采用第三章中的B法，除正常組大鼠外，其余各組大鼠均i.h.鹽酸甲氧氯普胺每只1.5ml，連續(xù)10天，然后 i.m.苯甲酸雌二醇注射液0.5mg/kg，連續(xù)25天，i.m.黃體酮注射液0.5mg/kg，連續(xù)5天。各組于造模后按體重給藥，劑量為每天5mg/kg，正常組和模型組給等體積的生理鹽水，連續(xù)30天。末次給藥24h后，釆用眼眶靜脈取血的方法，取血2ml，按酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中E2、P、PRL的含量；取各組大鼠第二對(duì)乳房，HE染色

8、后，觀察各組大鼠乳腺增生情況。
　　結(jié)果：
　　模型組大鼠血清中E2、PRL的含量均比正常組高，血清中P的含量比正常組低，乳腺組織病理切片顯示為四級(jí)增生，證明乳腺增生大鼠模型建立成功。與模型組比較，各治療組大鼠血清激素值均有所降低；與其他組比較，組方8明顯降低大鼠血清中E2、PRL的含量(P<0.05)、PRL(P<0.05)，提高P的含量(P<0.05)。病理切片結(jié)果顯示，大鼠乳腺組織增生情況恢復(fù)良好，各增生部位均恢復(fù)正常

9、，管腔內(nèi)分泌物大大減少，與正常組大鼠無(wú)明顯差異，治療效果最好，由此推測(cè)君+臣1+佐2為治療乳腺增生癥最優(yōu)處方。
　　模型組大鼠血清中PRL含量比正常組高，血清中E2、P含量比正常組低，證明高泌乳素血癥大鼠模型建立成功。與模型組比較，各治療組大鼠血清激素PRL值均有所降低；與其他組比較，組方8明顯降低大鼠血清泌乳素的含量(P<0.05)，治療效果優(yōu)于全方，由此確定組方君+臣1+佐2為治療乳腺增生癥與高泌乳素血癥的最優(yōu)處方。
　

10、　與全方比較，檢測(cè)得大麥芽堿的含量中君、君＋臣1和君＋臣1＋佐2中含量與全方中含量基本相似；芥子堿含量臣＋佐含量與全方相似；對(duì)比迷迭香酸的含量，君、君＋臣、君＋臣2、君＋臣2＋佐1、君＋臣2＋佐2和君＋臣1＋佐2與全方含量相近；丹酚酸B的含量來(lái)看，君＋臣2與臣＋佐與全方含量相似；對(duì)比哈巴俄苷，無(wú)麥芽組和君＋臣1＋佐2與全方含量相似；丹參酮ⅡA含量中，君＋臣2、臣＋佐與全方相似。
　　與正常組相比，模型 B組大鼠造模完成后為三級(jí)增生

11、，且在第30天時(shí)，其三級(jí)增生仍穩(wěn)定存在。造模成功后，與正常組相比，模型B組大鼠血清中，PRL的含量急劇增加(P<0.01)，隨后由于自身調(diào)節(jié)有所降低，在30天時(shí)趨于穩(wěn)定，但仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常值(P<0.01)。E2的含量先降低后升高，P的含量先升高后降低。PCR結(jié)果顯示，大鼠體內(nèi)PRL受體基因的表達(dá)急劇增加(P<0.01)，隨后由于自身調(diào)節(jié)有所降低，但在30天時(shí)趨于穩(wěn)定，且仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常值(P<0.01)。ER基因的表達(dá)先降低后升高，PR基

12、因的表達(dá)先升高后降低；Western Blot結(jié)果顯示，大鼠體內(nèi)PRL受體蛋白的表達(dá)數(shù)目急劇增加(P<0.01)，隨后由于自身調(diào)節(jié)有所降低，但在30天時(shí)趨于穩(wěn)定，且仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常值(P<0.01)。ER蛋白的表達(dá)先降低后升高，PR受體蛋白的表達(dá)先升高后降低。而模型 A組大鼠其病理切片一直顯示為二級(jí)增生，其激素變化、PCR及WB結(jié)果均顯示無(wú)明顯規(guī)律可循表明該方法制得的模型不穩(wěn)定。
　　與正常組比較，模型組大鼠血清中PRL含量顯著升高

13、（P<0.05），表明該模型具有乳腺增生的癥狀。與空白模型組比較，全方組、優(yōu)化方組、乳癖散結(jié)組、溴隱亭組均使大鼠血清中PRL含量有所降低。其中，優(yōu)化方組效果最明顯，含量與正常組相當(dāng)(P>0.05)；同時(shí)，病理組織切片結(jié)果顯示，模型組大鼠增生情況為三級(jí)。溴隱亭組大鼠為三級(jí)增生，全方組、乳癖散結(jié)組均為一級(jí)增生，優(yōu)化方組恢復(fù)至正常，效果優(yōu)于全方。
　　結(jié)論：
　　生麥芽、夏枯草、牡蠣、玄參、浙貝母、山慈菇、昆布合用，對(duì)乳腺增生癥和

14、高泌乳素血癥的治療效果均優(yōu)于全方。
　　使用方法先制備高泌乳素血癥后制備乳腺增生癥制得的乳腺增生癥伴高泌乳素血癥的大鼠疾病模型可以穩(wěn)定存在，適合用于研究回乳抑增復(fù)方發(fā)揮―異病同治‖作用機(jī)制等研究。
　　利用乳腺增生癥伴高泌乳素血癥大鼠疾病模型，驗(yàn)證了組方8對(duì)乳腺增生伴高泌乳素血癥疾病大鼠模型的療效要優(yōu)于全方；同時(shí)證明回乳抑增一號(hào)通過(guò)降低大鼠體內(nèi)泌乳素含量，從而調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸平衡，最終達(dá)到治愈乳腺增生癥伴高泌乳素血癥