內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞黏附分子-1（ELAM-1）對(duì)豬眼小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及TIMP-1的影響.pdf

1、青光眼是全球主要的致盲眼病，也是我國(guó)首位不可逆的致盲性眼病。了解青光眼的發(fā)病機(jī)制，對(duì)其進(jìn)行早期診斷、早期治療，是研究青光眼的重點(diǎn)課題。 基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類鋅離子依賴性內(nèi)源性蛋白水解酶，主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜?；|(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)是MMP天然的抑制劑之一。在人類的小梁網(wǎng)細(xì)胞上存在著MMP與TIMP，二者作用的平衡性對(duì)正常人眼維持小梁ECM與房水外流通暢十分重要。許多因素可以影響MMP

2、/TIMP的平衡性。而ELAM-1作為目前發(fā)現(xiàn)的唯一的青光眼特異性分子標(biāo)記，研究其對(duì)MMP/TIMP平衡的影響將加深我們對(duì)青光眼發(fā)病機(jī)制的了解。 在本實(shí)驗(yàn)中，主要研究氧化應(yīng)激對(duì)小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及TIMP-1的影響及ELAM-1與抗體結(jié)合后對(duì)小梁細(xì)胞MMP-3/TIMP-1平衡的影響。由此進(jìn)一步了解ELAM-1在青光眼發(fā)病機(jī)制中的作用。實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分。 一、氧化應(yīng)激下房水外流通路MMP-3及TIMP-1表達(dá)的研究目

3、的：研究氧化應(yīng)激對(duì)小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3/TIMP-1的影響，了解青光眼小梁細(xì)胞MMP/TIMP之間的平衡機(jī)制。 方法：將原代培養(yǎng)的豬小梁細(xì)胞血清饑餓培養(yǎng)16小時(shí)，分成對(duì)照組和H2O2組，對(duì)照組加入無血清培養(yǎng)基，H2O2組加入新鮮配制的1mmol/L的H2O2，5％CO2培養(yǎng)箱中37℃30分鐘。分別用免疫組化法、ELISA法和RT-PCR法檢測(cè)小梁細(xì)胞MMP-3及TIMP-1的表達(dá)。 結(jié)果：以上三種方法顯示對(duì)照組MMP-

4、3及TIMP-1表達(dá)均為陰性，H2O2組MMP-3及TIMP-1表達(dá)均為陽性，MMP-3/TIMP-1平衡未破壞。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，氧化應(yīng)激可以誘導(dǎo)小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及TIMP-1，并不破壞MMP-3/TIMP-1平衡關(guān)系。 二、ELAM-1對(duì)小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及TIMP-1的影響目的：通過研究ELAM-1與抗體結(jié)合后對(duì)小梁細(xì)胞表達(dá)MMP-3及TIMP-1的影響，進(jìn)一步了解ELAM-1在青光眼發(fā)病機(jī)制中的作

5、用。 方法：將原代培養(yǎng)的豬小梁細(xì)胞血清饑餓培養(yǎng)16小時(shí)，分為六組：Ⅰ)對(duì)照組，不加入任何藥物；Ⅱ)IL-1α組，加入IL-1α刺激；Ⅲ)ELAM-1Ab組，用IL-1α刺激后，再加入ELAM-1Ab;Ⅳ)ELAM-1Ab同時(shí)加入組，同時(shí)加入IL-1α和ELAM-1Ab；Ⅴ)IgG組，用IL-1α刺激后，加入ELAM-1Ab，再加入IgG交聯(lián)；Ⅵ)IgG同時(shí)加入組，同時(shí)加入IL-1α、ELAM-1Ab和IgG。對(duì)以上六組在相同作用

6、條件下作用后，分別用免疫組化法、ELISA法和RT-PCR法檢測(cè)小梁細(xì)胞MMP-3及TIMP-1的表達(dá)，同時(shí)用免疫組化法檢測(cè)ELAM-1的表達(dá)。 結(jié)果：在原代培養(yǎng)的豬小梁細(xì)胞中，免疫組化和ELISA法顯示第1組TIMP-1表達(dá)為陰性，其余五組TIMP-1表達(dá)均為陽性；RT-PCR顯示以上六組TIMP-1表達(dá)均為陽性。免疫組化法顯示Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ組的MMP-3表達(dá)為陽性，而RT-PCR顯示只有Ⅱ組的MMP-3表達(dá)為陽性，其余幾組MMP

7、-3表達(dá)均為陰性。另外，免疫組化法顯示Ⅱ組的ELAM-1表達(dá)為陽性，其余幾組ELAM-1表達(dá)均為陰性。 結(jié)論：外源性IL-1α能刺激豬小梁細(xì)胞表達(dá)ELAM-1、MMP-3和TIMP-1，ELAM-1與抗體結(jié)合或進(jìn)一步與IgG交聯(lián)后可以抑制MMP-3的表達(dá)，但不影響TIMP-1的表達(dá)，使得MMP/TIMP平衡被破壞。 基于以上兩部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測(cè)ELAM-1與抗體結(jié)合后破壞MMP/TIMP平衡可能在青光眼的發(fā)病機(jī)制中具有重