腸癌中RSPO2表達(dá)沉默的分子機(jī)制.pdf

1、目的：
　　R-spondin2(RSPO2)作為Wnt信號(hào)通路的調(diào)節(jié)因子，被認(rèn)為在腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)RSPO2腸癌組織和細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào)，在大部分腸癌中RSPO2發(fā)揮抑癌基因的功能，并且存在一種R-spondin2介導(dǎo)的LGR5依賴的Wnt信號(hào)通路負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。本課題將對(duì)腸癌中RSPO2表達(dá)沉默的分子機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法：
　　1)通過(guò)反轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腸癌組織中

2、RSPO2的mRNA表達(dá)水平。
　　2)通過(guò)生物信息學(xué)軟件Methyl Primer Express vl.0 software分析RSPO2基因啟動(dòng)子區(qū)域的CpG島。
　　3)通過(guò)甲基化測(cè)序PCR(BSP)和甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)腸癌細(xì)胞和組織中RSPO2基因CpG島的甲基化。
　　4)通過(guò)Sanger基因測(cè)序檢測(cè)腸癌組織RSPO2啟動(dòng)區(qū)基因突變情況。
　　5)通過(guò)TaqMan拷貝數(shù)變異分析實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腸

3、癌組織基因組RSPO2基因的拷貝數(shù)變化(CNV)。
　　結(jié)果：
　　1)腸癌組織RSPO2mRNA表達(dá)水平與癌旁組織相比確實(shí)出現(xiàn)顯著下調(diào)。
　　2) MSP結(jié)果顯示9種腸癌細(xì)胞系中RSPO2基因均發(fā)生了甲基化修飾，對(duì)照細(xì)胞HEK293則無(wú);76％的腸癌樣本的腫瘤組織發(fā)生了甲基化修飾，癌旁組織中則少很多;BSP結(jié)果顯示腸癌細(xì)胞和腸癌組織RSPO2啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)基本全部發(fā)生甲基化，而對(duì)照HEK293細(xì)胞和癌旁組織基本沒(méi)