柑橘類黃酮諾必擂停對荷瘤小鼠免疫功能的影響及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)肝癌發(fā)病率正呈逐年上升趨勢，是威脅人類健康的第八大疾病，每年新發(fā)肝癌中42％出現(xiàn)在我國大陸，已占我國腫瘤死因的第二位。腫瘤的形成是一個正常細胞生長過程改變和基因改變的多因素、多階段過程，機體免疫功能的異常，是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者都有不同程度的免疫功能低下狀態(tài)，如脾臟異常變大，胸腺嚴重萎縮，T、B細胞增殖力下降，IL-2含量下降等，這也是導致腫瘤無限制增長和免疫逃避的一個重要因素。因此，正確評價荷瘤機體的

2、免疫功能是研究抗腫瘤藥物作用機制的重要方面。 近年，尋找高效低毒的天然抗癌藥物與生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑成為世界新藥研發(fā)領(lǐng)域的熱點。柑橘類果實是我國傳統(tǒng)的中藥材，一般以橘皮入藥。諾必擂停(nobiletin)即是從蕓香科植物橘及其栽培變種的果實中提取的一種類黃酮，化學結(jié)構(gòu)：5,6,7,8,3′4′-六甲氧基黃酮(5,6,7,8,3′4′-hexamethoxyflavone)。國外眾多研究證明諾必擂停對胃癌、肺癌、白血病等多種腫瘤細胞作用

3、明顯，但未見肝癌研究報道。國內(nèi)其實驗研究甚少，未見免疫方面研究報道。鑒于免疫機制在抗腫瘤方面的重要作用，本實驗以Heps肝癌移植性實體瘤為模型，觀察了NOB對肝癌生長、細胞凋亡，及對荷瘤小鼠免疫功能的影響，旨在為諾必擂停的藥理學研究及臨床應(yīng)用提供一定理論依據(jù)。 衡量抗腫瘤療效的最直接的指標是瘤重、抑瘤率。構(gòu)建小鼠肝癌Heps實體瘤模型，末次給藥后24h，處死小鼠，解剖剝離腫瘤稱重，計算抑瘤率。諾必擂停三個劑量對腫瘤細胞均有顯著的

4、抑制生長作用，并呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。與模型組比較差異顯著(P＜0.01)，三次重復實驗抑瘤率均在30％以上，顯示了穩(wěn)定的抗腫瘤活性。誘導腫瘤細胞凋亡是目前抗腫瘤藥物的新靶點。我們觀察了諾必擂停對腫瘤細胞形態(tài)學的影響，發(fā)現(xiàn)用藥組腫瘤細胞凋亡明顯，電鏡下可見典型細胞凋亡形態(tài)變化，AO/EB雙熒光染色法可區(qū)分凋亡與壞死細胞，進一步證實了這點，提示諾必擂停可誘導腫瘤細胞的凋亡，與國外報道結(jié)果一致。 抗腫瘤免疫以細胞免疫為主，細胞因子

5、與CTL、NKC起協(xié)同抗腫瘤作用。我們?nèi)∑⑴K、胸腺及體重計算脾指數(shù)、胸腺指數(shù)；以遲發(fā)性超敏反應(yīng)觀察動物整體細胞免疫機能；MTT法檢測ConA刺激T淋巴細胞增殖，LPS刺激B淋巴細胞增殖；乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測CTL、NKC殺傷活性；雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測脾細胞誘生IL-2及腹腔巨噬細胞誘生TNF-α量；分光光度法測定血清溶血素。結(jié)果表明，諾必擂停各劑量組均可降低小鼠因荷瘤所致脾指數(shù)異常升高，使降低的胸腺指數(shù)明顯升高，

6、證明諾必擂停對荷瘤小鼠有免疫保護作用；提高荷瘤小鼠降低的遲發(fā)性超敏反應(yīng)；明顯增強了脾T、B淋巴細胞增殖反應(yīng)；使脾細胞分泌IL-2及腹腔巨噬細胞分泌TNF-α量顯著提高；CTL、NK細胞殺傷活性顯著增強；血清溶血素水平提高。 綜上所述，NOB對小鼠移植性實體瘤Heps肝癌有良好的抑制作用，其作用機制有：直接作用于腫瘤細胞，誘導凋亡；提高荷瘤小鼠特異性和非特異性細胞免疫功能及體液免疫功能；提高免疫細胞殺傷活性；促進抗腫瘤細胞因子分泌