柑橘類黃酮諾必擂停對K562細胞的體內體外作用及其機制的研究.pdf

1、目的：研究柑橘類黃酮諾必擂停(Nobiletin，NOB)對慢性粒細胞白血病細胞K562的作用，通過整體、細胞以及分子水平的研究，初步探討了其可能的作用機理。 方法：整體水平建立K562裸鼠體內異種移植瘤模型，分別給予不同劑量的NOB治療，測定各給藥組對移植瘤的抑制增殖作用，HE染色觀察各組裸鼠腫瘤組織的病理變化，免疫組化染色技術觀察腫瘤組織中VEGF的表達及微血管密度；細胞水平MTT法檢測NOB對K562細胞的體外抑制作用，A

2、O/EB熒光染色觀察NOB誘導K562細胞凋亡，Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術檢測細胞凋亡率，免疫蛋白印跡(Western blotting)及RT-PCR分別檢測NOB對K562細胞VEGF蛋白及VEGFmRNA表達的影響。 結果： (1)與對照組比較，NOB在體內及體外均能顯著抑制K562細胞的增殖。 (2)裸鼠模型組腫瘤組織新生血管豐富，腫瘤生長旺盛，細胞結構完整，NOB組及陽性組腫瘤組

3、織有明顯的出血壞死區(qū)，并伴有粒細胞浸潤，壞死的細胞核溶解，細胞出現(xiàn)融合。 (3)免疫組化顯示：模型組VEGF及CD34高表達，與模型組相比，NOB可顯著降低腫瘤組織VEGF陽性細胞的百分比及微血管密度(P<0.01，P<0.05)。 (4) AO/EB熒光染色結果顯示：對照組少見凋亡細胞，與對照組相比，NOB組凋亡細胞數(shù)量顯著增多；流式細胞術顯示NOB組細胞凋亡率顯著上升(P<0.01)。 (5) NOB能抑制K