柑橘類黃酮諾必擂停對K562細(xì)胞的體內(nèi)體外作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究柑橘類黃酮諾必擂停(Nobiletin，NOB)對慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞K562的作用，通過整體、細(xì)胞以及分子水平的研究，初步探討了其可能的作用機(jī)理。 方法：整體水平建立K562裸鼠體內(nèi)異種移植瘤模型，分別給予不同劑量的NOB治療，測定各給藥組對移植瘤的抑制增殖作用，HE染色觀察各組裸鼠腫瘤組織的病理變化，免疫組化染色技術(shù)觀察腫瘤組織中VEGF的表達(dá)及微血管密度；細(xì)胞水平MTT法檢測NOB對K562細(xì)胞的體外抑制作用，A

2、O/EB熒光染色觀察NOB誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率，免疫蛋白印跡(Western blotting)及RT-PCR分別檢測NOB對K562細(xì)胞VEGF蛋白及VEGFmRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果： (1)與對照組比較，NOB在體內(nèi)及體外均能顯著抑制K562細(xì)胞的增殖。 (2)裸鼠模型組腫瘤組織新生血管豐富，腫瘤生長旺盛，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，NOB組及陽性組腫瘤組

3、織有明顯的出血壞死區(qū)，并伴有粒細(xì)胞浸潤，壞死的細(xì)胞核溶解，細(xì)胞出現(xiàn)融合。 (3)免疫組化顯示：模型組VEGF及CD34高表達(dá)，與模型組相比，NOB可顯著降低腫瘤組織VEGF陽性細(xì)胞的百分比及微血管密度(P<0.01，P<0.05)。 (4) AO/EB熒光染色結(jié)果顯示：對照組少見凋亡細(xì)胞，與對照組相比，NOB組凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著增多；流式細(xì)胞術(shù)顯示NOB組細(xì)胞凋亡率顯著上升(P<0.01)。 (5) NOB能抑制K