秋茄乙醇提取物對胰島素抵抗和2型糖尿病模型大鼠的防治作用.pdf

1、秋茄(Kandelia candel)是生長在淺海鹽灘上的紅樹林植物,植物分類歸屬于紅樹科秋茄屬,為秋茄屬僅有的一種。樹高約2-3米,呈大片生長,形成秋茄群系。秋茄分布廣泛,印度、泰國、越南、馬來西亞、日本等處于亞洲熱帶和亞熱帶國家的海岸均可見到,國內(nèi)主要在福建、廣西、廣東、海南、臺灣、香港的海灣有分布。秋茄在民間作為藥用。其皮具有收斂止血和抗菌效果；其根的乙醇浸取液可治療風濕性關(guān)節(jié)炎。近年來,尋找秋茄的化學(xué)成份和探索其生物活性已經(jīng)成為

2、受關(guān)注的研究方向。1997年,盧昌義等報道了秋茄種子中含草酸和蘋果酸等有機酸,2001年,Kimura Kenichiro等發(fā)現(xiàn)秋茄葉中含有軟脂酸和硬脂酸等飽和脂肪酸,油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸。到目前,從秋茄的種子、葉、枝、皮中已經(jīng)分離到化學(xué)成分主要有多糖、甾醇類、三萜類化合物、黃酮類化合物、生物堿類以及鞣質(zhì)等。而這些化學(xué)成份具有多種生物活性,如黃酮類化合物,又稱黃堿素或黃酮,具有抗菌、消炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿、抗氧化

3、、抗癌、防癌、抑制脂肪酶等多方面的生物活性,是重要的天然產(chǎn)物之一；三萜類化合物具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、抗病毒等活性；植物甾醇具有抗氧化、抗炎、防止冠狀動脈粥樣硬化、降低膽固醇等活性。這些化學(xué)成分常見于大部分藥物植物中,常被提取用于治療心血管系統(tǒng)、腫瘤、炎癥等相關(guān)疾病。近年來,國內(nèi)外針對秋茄化學(xué)成分進行藥理活性方面的研究,結(jié)果表明:1.秋茄具有抗菌活性。秋茄乙醇浸取液和水浸液對3種植物真菌Fusarium oxysporum、Hem

4、inthosporium sp.和Semphyllium sp.具有抑制作用；其根、葉、果、枝的水和乙醇提取物具有體外抑菌、殺菌活性。2、秋茄抗胃潰瘍作用。秋茄水提取物具有對抗水浸束縛應(yīng)激和幽門結(jié)扎致大鼠胃潰瘍的作用。3、秋茄葉色素具有強的抗氧化活性。4、秋茄根乙醇提取物具有抗腫瘤活性。但是,對秋茄的抗糖尿病活性方面尚未有報導(dǎo)。秋茄所含的多糖和黃酮成分具有降血糖作用。多糖本身有降血糖活性,多種含有多糖的植物均具有抗糖尿病作用,如靈芝多糖

5、可降低四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠血糖。此外,當歸、枸杞、南瓜、黨參、玉米須、桑葉、黃芪等的多糖成份均具有對抗實驗糖尿病動物模型,產(chǎn)生降血糖作用。黃酮也是主要的降血糖成份,黃酮類化合可通過其抗氧化活性,抑制脂質(zhì)過氧化,穩(wěn)定生物膜,對胰島損傷產(chǎn)生保護作用。研究表明,槲皮素的抗氧化性可減輕鏈脲佐菌素對胰島細胞的損壞,并誘導(dǎo)胰島再生和促進胰島素釋放。黃酮具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性,該活性可導(dǎo)致碳水化合物的消化緩慢,單糖的吸收緩慢,餐后血糖不易升

6、高從而產(chǎn)生降血糖作用。此外,黃酮還具有擬胰島素作用,可產(chǎn)生胰島素樣降血糖作用機制。除了多糖和黃酮,三萜類化合物、甾醇和鞣質(zhì)均分別有報導(dǎo)具有降血糖作用。秋茄的皮和葉中含有兒茶素、蘆丁、黃烷-3-醇、阿福豆素等豐富的黃酮類化合物,其種子含有果膠多糖,其皮含有大量鞣質(zhì)。為了探討秋茄是否有抗糖尿病作用,本研究對秋茄枝進行醇提,然后通過高脂膳食誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠模型,在此基礎(chǔ)上再注射小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,預(yù)防性給秋茄乙醇提取物進

7、行干預(yù),觀察秋茄對胰島素抵抗大鼠模型和2型糖尿病大鼠模型的防治作用,為糖尿病的治療提供實驗依據(jù)。
　　 實驗研究分為三部分:
　　 1.秋茄枝的乙醇提取
　　 方法:紅樹林植物經(jīng)鑒定為秋茄。取其枝35kg進行粉碎,用95％7,醇回流提取,取出提取液,離心,減壓濃縮,經(jīng)真空冷凍干燥機凍干后,獲得乙醇提取物干粉用于實驗。
　　 結(jié)果:秋茄枝乙醇提取過程順利,終獲得乙醇提取物干粉為3.4kg。
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8、.秋茄乙醇提取物對胰島素抵抗大鼠模型的防治作用
　　 目的:觀察秋茄乙醇提取物對胰島素抵抗大鼠模型的胰島素敏感性、糖耐量、血脂的影響。
　　 方法:(1)取健康SD大鼠72只,隨機分為秋茄乙醇提取物高劑量組(2g/kg)、秋茄乙醇提取物中劑量組(1g/kg)、秋茄乙醇提取物低劑量組(0.25g/kg)、二甲雙胍組(200mg/kg)、模型組、正常組。除正常組給予普通飼料飼養(yǎng)外,其余均給予高脂飼料連續(xù)飼養(yǎng)8周,在第5周起,

9、各組每天灌胃給予相應(yīng)藥物1次,連續(xù)4周干預(yù)。模型組和正常組給等劑量的1％羧甲基纖維素鈉。(2)藥物干預(yù)4周后,禁食12h,眼眶后靜脈叢采血。測定空腹血清血糖(fasting serumglucose,FSG)、空腹胰島素(fasting irlsulin,FINS),并計算求出胰島素敏感系數(shù)(inslin sensitivity,ISI)；測定總膽固醇(total cho]esterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG

10、)、高密度脂蛋白-膽固醇(high-densitylipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白-膽固醇(low-densitylipoprotein cholesterol,LDL-C)、游離脂肪酸(free fatty acids,FFA)的水平；空腹采血后,立即灌胃給予25％葡萄糖液2.5g/kg,2h后再次采血測血糖值。
　　 結(jié)果:秋茄乙醇提取物高、中、低劑量明顯降低FINS,改善糖耐量,提

11、高ISI；降低TC、TG、LDL-C、FFA水平。以中劑量效果顯著。
　　 結(jié)論:秋茄乙醇提取物具有降低胰島素抵抗大鼠高胰島素血癥、改善糖耐量損傷的作用,并提高胰島素敏感性。
　　 3.秋茄乙醇提取物對2型糖尿病大鼠模型相關(guān)指標的影響
　　 目的:觀察秋茄乙醇提取物對2型糖尿病大鼠模型的血糖、胰島素敏感性、血脂、胰腺的病理改變及肝組織抗氧化能力的影響。
　　 方法:(1)以上大鼠在連續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)8周,并

12、且實驗組大鼠已經(jīng)連續(xù)給藥4周干預(yù)。在此基礎(chǔ)上,動物禁食12h,模型組和實驗組大鼠腹腔注射0.3％STZ30mg/kg,建立2型糖尿病模型。正常組腹腔注射等容積的O.1m01/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。(2)5天后禁食12h,眼眶后靜脈叢采血。測定FSG、FINS水平和ISI；測定TC、TG、HDL-C、LDL-C、FFA水平；處死大鼠,取出胰臟作病理檢查；完整取出肝臟,稱重,計算肝指數(shù),取部分肝組織作病理檢查,并準確稱取0.2g肝組織,

13、制成10％肝勻漿,測定肝組織中超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)的活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。
　　 結(jié)果:秋茄乙醇提取物高、中、低劑量不同程度降低FSG、提高了ISI；降低TG、TC、LDL-C和FFA水平,提高HDL-C水平；減輕STZ對胰島