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文檔簡介
1、KCNE1,為電壓依賴性鉀離子通道KCNE1/KCNQ1(亦稱IKs通道)的調(diào)節(jié)亞基,該通道介導(dǎo)心肌細胞動作電位中的復(fù)極化IKs電流。而KCNE1對于該通道獨特的慢激活特征的維持是不可替代的。據(jù)文獻報道KCNE1的胞內(nèi)片段(C-端)在調(diào)控IKs通道動力學特征上起主要作用,但具體的部位并不十分清楚。另據(jù)文獻報道kcnel基因的突變可致臨床上具有很高致死率的心率不齊疾病心臟長QT綜合征的五型(LQT5)。
近年來有研究發(fā)現(xiàn)多態(tài)
2、性位點(single nucleotide polymorphism,SNP)也具有潛在的致病性,但與LQTS的關(guān)系尚不十分明確?;驇斓馁Y料表明,人源kcnel存在一個SNP位點318C/A(氨基酸:106C/Ter),318A造成終止密碼子提前出現(xiàn),導(dǎo)致KCNE1胞內(nèi)C-末端24個氨基酸的缺失(末端缺失片段稱C24,末端缺失C24的突變體稱KCNE1-△24)。通過基因同源性比對進一步發(fā)現(xiàn),C24在不同種系的KCNE1間有很高的同源
3、性,但在不同種系KCNE家族成員(KCNE1-5)間的同源性卻很低,提示C24片段與KCNE1的獨特功能有關(guān)。因此,本文擬通過建立突變體KCNE1-△24,研究該突變體與KCNQ1之間的相互作用,分析該突變體的功能。
利用分子克隆和點突變技術(shù)構(gòu)建了野生型的KCNE1和突變體KCNE1-△24,并在HEK293及CHO細胞系中進行瞬時表達。蛋白免疫印跡、細胞免疫染色和免疫共沉淀的結(jié)果表明,該突變體在細胞系中的表達、亞細胞定位
4、與野生型KCNE1無明顯差異,說明C24片段缺失不影響其表達、亞細胞定位及與KCNQ1的裝配。全細胞膜片鉗記錄數(shù)據(jù)表明,該突變體與野生型KCNQ1所形成的通道呈現(xiàn)電壓依賴性曲線右移及通道激活速率變慢,而通道的電流密度無顯著性變化。
本文的數(shù)據(jù)提示,末端缺失C24片段的突變體KCNE1-△24可與野生型KCNQ1形成功能性通道;該突變通道在生物物理學特征上明顯不同于野生型的通道,表現(xiàn)為通道的開放時程變慢及開放所需的激活電壓變
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