水稻干旱敏感突變體dsm1的基因克隆與功能分析.pdf

1、本研究以來自本實驗室構建的T-DNA插入突變體庫（以日本睛為遺傳背景）為研究材料。通過對苗期材料進行PEG篩選試驗，獲得一份干旱敏感的突變體dsm1，通過模擬干旱試驗、結合生理指標分析等，并通過圖位克隆手段，對控制該突變體的基因進行精細定位，圖位克隆了DSM1基因。本實驗具體研究結果如下:
　　1.干旱敏感突變體dsm1的篩選與驗證:通過利用PEG等模擬不同非生物脅迫條件，測定丙二醛和含水量等生理指標，進行抗旱驗證。結果表明，與野

2、生型日本晴相比，突變體dsm1對干旱脅迫表現(xiàn)出極度敏感性，在復水后表現(xiàn)出枯黃至死亡，且突變體植株葉片細胞的所測各項生理指標參數(shù)均明顯改變。
　　2.突變體dsm1與野生型的農藝性狀比較:與野生型相比，突變體dsm1對干旱敏感表型出現(xiàn)在三葉期。在成熟期，突變體dsm1伴有窄葉表型，其他表型均與野生型同。以該表型作為農藝性狀統(tǒng)計篩選材料的表型。
　　3.圖位克隆:由于干旱是數(shù)量性狀，極難克隆基因。本論文中利用窄葉表型代替干旱表型

3、，經過初定位，將DSM1基因定位到第4染色體上，再經過精細定位，將DSM1基因定位到80 kb范圍內，其中一個基因LOC_Os04g52479發(fā)生了單堿基突變，由胞嘧啶突變?yōu)轼B嘌呤，導致氨基酸的替換，即精氨酸變?yōu)楦拾彼?。我們將LOC_0s04g52479定位候選基因。
　　4.互補試驗。構建含有LOC_Os04g52479全長CDS的雙元表達載體，轉化突變體dsm1，獲得一批212份陽性轉化植株。在T1代進行抗逆(PEG)篩選，部