膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研制一種以膠聯(lián)羊膜為載體的藥物緩釋材料-膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜，初步研究其緩釋性能和治療效果，探討該材料用于眼表移植及組織修復(fù)的可行性和優(yōu)越性，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 本研究分為三部分： 實(shí)驗(yàn)一：bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜的體外緩釋作用。 實(shí)驗(yàn)二：bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜治療角膜堿燒傷的實(shí)驗(yàn)研究。 實(shí)驗(yàn)三：更昔洛韋膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜的緩釋性能。 方法： 實(shí)驗(yàn)一：將bFGF與纖維蛋白膠(FG

2、)混合后再與羊膜(AM)膠聯(lián)，制成濃度為1ng/ml(1ng/cm3)的bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜(bFAM)，將此藥膜放入透明試管中，每日留取浸出液，采用ELISA方法測定其中bFGF的含量，研究bFAM的體外緩釋作用。 實(shí)驗(yàn)二：將bFGF與纖維蛋白膠混合后再與羊膜膠聯(lián)，制成濃度為2.5μg/ml(2.5μg/cm3)的bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜。新西蘭大白兔45只，浸有1mol/LNaOH的圓形濾紙片貼于兔角膜表面，建立新西蘭大

3、白兔角膜堿燒傷模型，隨機(jī)分為3組：A組：bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜移植組，B組：羊膜移植組，C組：燒傷未治療組，每組15只。4～6小時內(nèi)按分組行bFAM/AM移植術(shù)。術(shù)后觀察羊膜溶解脫落、角膜水腫混濁、角膜上皮愈合等情況，并對新生血管、角膜透明度、熒光素染色情況進(jìn)行評分。術(shù)后第7、14、28d，每組處死5只動物，取標(biāo)本作組織病理學(xué)檢查，免疫組織化學(xué)方法半定量檢測角膜中bFGF的表達(dá)。 實(shí)驗(yàn)三：體外實(shí)驗(yàn)：將纖維蛋白膠與更昔洛韋(GC

4、V)混合后與羊膜膠聯(lián)，制成濃度為5mg/ml(5mg/cm3)的更昔洛韋膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜(GFAM)，將此藥膜放入透明試管中，每日留取浸出液，采用高效液相色譜法(HPLC)測定其中GCV的含量，研究GFAM的體外緩釋作用。在體實(shí)驗(yàn)：設(shè)立實(shí)驗(yàn)組與對照組；實(shí)驗(yàn)組在兔眼表作GFAM移植后，1d、2d、3d、4d、5d分別抽取房水，檢測其中GCV的質(zhì)量濃度：對照組滴1mg/mlGCV眼液100ul，每2h一次，于第5次滴眼后1.5h抽取房水，H

5、PLC法測試房水中GCV的質(zhì)量濃度。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)一：體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示，24 h后bFGF的累計釋放率為(41.85±4.45)％，48 h后為(61.5±4.49)％，以后釋放逐漸減慢，96 h累計釋放率達(dá)(83.3±6.54)％，此后釋放趨于平衡。 實(shí)驗(yàn)二： 1.羊膜溶解脫落情況：術(shù)后第5d，B組單層羊膜溶解，部分動物角膜表面羊膜完全脫落，而A組bFGF膠聯(lián)藥膜尚無明顯變化。至術(shù)后1 4d時，A組bF

6、GF膠聯(lián)藥膜大部分溶解脫落。 2.角膜混濁度評分：術(shù)后28d時，A組與B組以及B組與C組間比較差異在統(tǒng)計學(xué)上均有顯著意義(P＜0.05)，A組角膜混濁度最輕。其余時間點(diǎn)各組間差異在統(tǒng)計學(xué)上無顯著意義(P＞0.05)。 3.角膜新生血管評分：術(shù)后第14d時，A、B兩組角膜新生血管評分與C組差異在統(tǒng)計學(xué)上無顯著意義(P＞0.05)；28d時，A組角膜新生血管面積小于C組(P＜0.01)，B組亦小于C組(P＜0.05)。

7、 4.角膜上皮愈合面積評分：術(shù)后第14、28d時，A組及B組角膜上皮愈合面積均多于C組，在統(tǒng)計學(xué)上差異具有顯著性(P＜0.01)，且2個時間點(diǎn)A組及B組角膜上皮愈合面積在統(tǒng)計學(xué)上差異具有顯著性(P＜0.05)。 5.角膜中bFGF的表達(dá)：術(shù)后7d時，A組bFGF表達(dá)水平高于B組及C組，在統(tǒng)計學(xué)上差異具有顯著性(P＜0.05)，其陽性表達(dá)主要位于角膜上皮細(xì)胞及淺基質(zhì)層。其余時間點(diǎn)3組間bFGF表達(dá)在統(tǒng)計學(xué)上差異無顯著性(P＞0.

8、05)。 實(shí)驗(yàn)三： 1.體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示，24 h后GCV的累計釋放率(45.67±5.32)％，48 h后為(63.42±4.68)％，以后釋放逐漸減慢，96h累計釋放率達(dá)(76.57±5.49)％，此后釋放趨于平衡。 2.動物實(shí)驗(yàn)表明：對照組房水中GCV濃度為(0.501±0.040)μg/ml。實(shí)驗(yàn)組房水中GCV濃度隨時間逐漸降低。第1d，實(shí)驗(yàn)組房水GCV濃度為(0.613±0.037)μg/ml，實(shí)驗(yàn)組房

9、水藥物濃度高于對照組，差異在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著意義(P＜0.01)。第2d，實(shí)驗(yàn)組房水GCV濃度為(0.554±0.093)μg/ml，高于對照組GCV濃度，但差異在統(tǒng)計學(xué)上無顯著意義(P＞0.05)。第3d，實(shí)驗(yàn)組房水GCV濃度為(0.443±0.043)μg/ml，低于對照組藥物濃度，差異在統(tǒng)計學(xué)上無顯著意義(P＞0.05)。第4～5d，實(shí)驗(yàn)組房水藥物濃度低于對照組，差異在統(tǒng)計學(xué)上具有顯著意義(P＜0.05)。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)初

10、步研究了bFGF和更昔洛韋膠聯(lián)羊膜藥膜的緩釋作用，以及bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜對角膜堿燒傷的治療效果，結(jié)論如下： 1、在體外條件下bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜具有一定的緩釋作用。 2、bFGF膠聯(lián)羊膜緩釋藥膜移植治療兔角膜堿燒傷較單層羊膜具有更好的治療效果，它可以延長羊膜在角膜創(chuàng)面的覆蓋時間，促進(jìn)上皮愈合，防止角膜潰瘍形成或穿孔，抑制堿燒傷后角膜新生血管形成，減輕瘢痕程度，提高角膜透明性。 3、在體外及眼表條件下，更