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文檔簡介
1、目的:制備一種藥物羊膜材料,即負載表皮生長因子/殼聚糖納米粒的膠聯(lián)羊膜,初步研究該材料的體外釋藥性能。
方法:⑴離子交聯(lián)法制備載表皮生長因子的殼聚糖納米粒(rhEGF/CSnanoparticles),并考察其粒徑,表面電位,多分散性和包封率等特征。⑵與未被包封的表皮生長因子相比較,考察殼聚糖納米粒包封的表皮生長因子在兔眼結(jié)膜勻漿中的穩(wěn)定性。⑶將載藥殼聚糖納米粒加入到纖維蛋白膠試劑盒中的凝血酶溶液中,再將此溶液與在羊膜表面
2、覆蓋的纖維蛋白原溶液混合及反應(yīng),制備出載表皮生長因子/殼聚糖納米粒膠聯(lián)羊膜(rhEGF/CS-FBAM)。分別與rhEGF/CS納米粒和載單純表皮生長因子的膠聯(lián)羊膜(rhEGF-FBAM)比較,考察rhEGF/CS-FBAM釋放表皮生長因子的性能。⑷從rhEGF/CS-FBAM中釋放的表皮生長因子加入到細胞培養(yǎng)基中,用MTT法考察其對體外培養(yǎng)的小鼠成纖維細胞(BALB/c3T3)的增殖作用,以加入單純表皮生長因子的細胞培養(yǎng)基為陽性對照組
3、,不加表皮生長因子的細胞培養(yǎng)基為陰性對照組。
結(jié)果:①制備的載表皮生長因子的殼聚糖納米粒粒徑分布在264.0±4.2~288.6±2.8 nm,表面電位分布在31.3±0.5~43.7±0.8 mV,多分散性分布在0.19±0.02~0.26±0.02,包封率(%)分布在54.87±2.94~67.03±1.22。②在兔眼結(jié)膜勻漿中孵育1h,2h,3h,4h,5h,6h后,殼聚糖納米粒包封的表皮生長因子在各個時間點上的回收
4、率均高于未被包封的表皮生長因子(P<0.05)。③rhEGF/CS納米粒能持續(xù)釋放表皮生長因子約72h,初始階段有明顯的突釋現(xiàn)象。rhEGF-FBAM能持續(xù)釋放表皮生長因子約96h,未見明顯的突釋。相比前兩者,rhEGF/CS-FBAM釋放表皮生長因子更為穩(wěn)定和緩慢,可持續(xù)14d,且其釋藥速率可隨制備rhEGF/CS-FBAM時纖維蛋白原或凝血酶的濃度增加而下降。④在各個時間點上,實驗組光密度值(OD)高于陰性對照組(P<0.05),與
5、陽性對照組比較無差別(P>0.05)。
結(jié)論:本研究設(shè)計制備的藥物羊膜材料結(jié)合了殼聚糖納米粒,纖維蛋白膠和羊膜三者的優(yōu)點,具有以下性能:⑴殼聚糖納米??杀Wo表皮生長因子,提高其生物穩(wěn)定性。⑵纖維蛋白膠可作為藥物儲存庫,可長時間緩釋控釋表皮生長因子。⑶羊膜可作為移植材料,為傷口的修復(fù)提供基底膜。相比于單純羊膜和膠聯(lián)羊膜,rhEGF/CS-FBAM在移植的同時,可有效釋放治療性生長因子,更好的促進傷口愈合。該復(fù)合羊膜材料的臨床
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