膠聯(lián)羊膜的制備及臨床前研究.pdf

1、目的: 研究一種新型的醫(yī)用生物材料-膠聯(lián)羊膜的制備方法和保存條件、組織形態(tài)學(xué)、生物力學(xué)性能及體外細(xì)胞相容性探討該新型醫(yī)用材料用于眼表移植及組織修復(fù)的可行性和優(yōu)越性。 本研究分為四部分： 一、膠聯(lián)羊膜的制備及形態(tài)學(xué)觀察； 二、膠聯(lián)羊膜的生物力學(xué)性能評(píng)價(jià)； 三、膠聯(lián)羊膜的體外細(xì)胞相容性研究； 四：膠聯(lián)羊膜的保存條件初步研究。 方法： 一、經(jīng)一定程序?qū)⒀蚰ず屠w維蛋白膠粘合制備成膠

2、聯(lián)羊膜，取新鮮制備的膠聯(lián)羊膜，大體觀察，手術(shù)顯微鏡下觀察，并行組織學(xué)切片，HE染色光鏡觀察并照相。 二、隨機(jī)選取制備好的12片膠聯(lián)羊膜在電子萬(wàn)能試驗(yàn)機(jī)上進(jìn)行一維拉伸性能測(cè)試，以同等數(shù)量的單層羊膜和雙層羊膜作對(duì)照，得出抗拉強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率、彈性模量及應(yīng)力-應(yīng)變曲線等。 三、無(wú)菌條件下取新鮮兔眼球，剖取角膜上皮組織，以單層膠聯(lián)羊膜為載體進(jìn)行角膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察不同階段培養(yǎng)的細(xì)胞的形態(tài)，網(wǎng)格樣目鏡標(biāo)記格觀察

3、不同時(shí)間的細(xì)胞生長(zhǎng)覆蓋面積，以去上皮羊膜為載體的細(xì)胞培養(yǎng)作對(duì)照。 四、按照羊膜常規(guī)保存方法即無(wú)水丙三醇4℃保存膠聯(lián)羊膜。取保存20d和40d的膠聯(lián)羊膜，行大體觀察、組織學(xué)切片HE染色觀察形態(tài)變化，以新鮮制備的膠聯(lián)羊膜為對(duì)照。取保存6月的單層膠聯(lián)羊膜，掃描電鏡下觀察膠表面情況，以新鮮制備的膠聯(lián)羊膜為對(duì)照。對(duì)無(wú)水丙三醇4℃保存1月的纖維蛋白膠的保存液測(cè)定其中蛋白濃度。 結(jié)果: 一、大體觀膠聯(lián)羊膜的厚度明顯增加，約為0

4、.1-0.3 mm，膠聯(lián)羊膜成一整體，手術(shù)顯微鏡下難以將其雙層羊膜分開(kāi)，組織切片示羊膜、纖維蛋白膠結(jié)構(gòu)完整，羊膜與膠粘合緊密。雙層膠聯(lián)羊膜的粘合方式為羊膜的基底面貼基底面，單層膠聯(lián)羊膜的粘合方式為羊膜的基底面貼纖維蛋白膠，游離的羊膜上皮面可見(jiàn)呈單層柱狀排列的羊膜上皮細(xì)胞，羊膜基底面與膠間無(wú)明顯空隙，未見(jiàn)羊膜皺縮，中間纖維蛋白厚度較均一，未見(jiàn)明顯的纖維分層和纖維變性。 二、膠聯(lián)羊膜的抗拉強(qiáng)度為0.727±0.142Mpa；斷裂伸長(zhǎng)

5、率為24.130±4.523％；彈性模量為1.283±0.482 Mpa；應(yīng)力-應(yīng)變曲線形態(tài)規(guī)則，重復(fù)性好。膠聯(lián)羊膜的抗拉強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率較單層羊膜和雙層羊膜明顯增加，膠聯(lián)羊膜的彈性模量小于單層羊膜和雙層羊膜(P<0.01)。 三、角膜緣上皮細(xì)胞在膠聯(lián)羊膜上黏附生長(zhǎng)增殖，體外培養(yǎng)7d左右即形成單層上皮細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組(去上皮羊膜為載體)比較細(xì)胞生長(zhǎng)覆蓋面積第2d至第7d差異有顯著性(P<0.05)。 四、無(wú)水丙三醇4

6、℃保存20d和40d的膠聯(lián)羊膜較新鮮膠聯(lián)羊膜稍薄，組織切片示羊膜有一定縮水，但羊膜與膠粘合緊密。保存6月的膠聯(lián)羊膜外觀完整，其纖維蛋白膠面的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)較模糊；而新鮮制備的膠聯(lián)羊膜纖維蛋白膠面可見(jiàn)突起的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。無(wú)水丙三醇4℃保存1月的纖維蛋白膠有部分降解。 結(jié)論: 1、羊膜和纖維蛋白膠可結(jié)合并制成一種新型材料-膠聯(lián)羊膜，該材料羊膜與膠粘合緊密，鏡下形態(tài)規(guī)則。 2、膠聯(lián)羊膜復(fù)合材料具有良好的生物力學(xué)特性，其柔