羊膜制備工藝的研究以及改良.pdf

1、目的：
　　 通過對現(xiàn)有羊膜制備工藝進行研究比較，分別從滅菌、保存條件以及對傳統(tǒng)羊膜貼載物改進這幾個方面入手，以期尋找出一種對羊膜損傷小，便于制備，易于保存，更加方便臨床使用且易推廣的方法。
　　 本實驗共分為三部分：
　　 實驗一：檢測常用滅菌方式對羊膜上皮性狀影響
　　 實驗二：探討不同保存條件對羊膜性狀的影響
　　 實驗三：將無紡材料（聚丙烯無紡布，Polypropylene Non-wov

2、en Substrates）作為新型羊膜貼載物的研究
　　 方法：
　　 實驗一：取健康剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦胎盤羊膜，隨機分為四組，分別以抗菌素（含青霉素10，00U/ml，慶大霉素10，00U/ml、二性霉素B2.5μg/ml）、過氧乙酸/乙醇混合液（過氧乙酸12.5ml，96％乙醇125ml，蒸餾水362.5ml）、γ-射線、0.5％碘伏滅菌，行病原學檢測確認達到臨床運用標準后，HE染色觀察羊膜上皮細胞形態(tài)變化；免疫熒光、RT

3、-PCR檢測肝細胞生長因子（HGF）、金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）及其mRNA的表達，并設(shè)未經(jīng)任何滅菌處理的羊膜作為對照。
　　 實驗二：將按常規(guī)方法制備好的羊膜隨機分為三組，分別于4℃，-20℃以及-80℃保存1月，3月，6月后，分別行光鏡以及電鏡觀察，比較不同保存組之間羊膜上皮細胞以及基質(zhì)的變化，評估不同保存條件對羊膜的影響。
　　 實驗三：用新型無紡布替代硝酸纖維濾膜作為羊膜貼載物，探討羊膜與無紡布的不

4、同貼載模式，并將羊膜分別貼載于硝酸纖維濾膜、無紡布后各置于純甘油-80℃保存1個月，行HE染色、透射電鏡檢測，觀察羊膜上皮細胞以及基質(zhì)的形態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 實驗一：所采用的幾種滅菌方法病原學培養(yǎng)結(jié)果均為陰性，經(jīng)過氧乙酸/乙醇混合液和抗菌藥處理的羊膜細胞形態(tài)完好，而經(jīng)γ-射線處理的細胞形態(tài)損害較大。經(jīng)滅菌處理后，羊膜細胞的HGF和TIMP-1蛋白表達均有所下降（P<0.05），由高到低依次為PES組、抗菌藥組、碘伏

5、組和γ-射線組；HGF和TIMP-1的mRNA表達也有下降（P<0.05），其中γ-射線處理組下降趨勢更明顯（P<0.05），其余3個處理組間無明顯差別（P>0.05）。
　　 實驗二：經(jīng)4℃保存的羊膜隨著時間的延長羊膜上皮細胞破壞加重，在保存到3個月的時候，羊膜上皮細胞丟失較為嚴重。經(jīng)-20℃和一80℃保存的羊膜上皮細胞隨保存時間延長也出現(xiàn)破壞，但損害程度較小，且保存3個月與保存6個月相比較無明顯差異。在相同時間點上，-20℃

6、保存的羊膜與-80℃保存的羊膜相比較，上皮細胞有差異但不顯著，遠優(yōu)于4℃保存。另外，羊膜基質(zhì)在4℃保存6個月后發(fā)生變化，膠原纖維減少，而-20℃和-80℃保存的羊膜基質(zhì)無明顯變化。
　　 實驗三：與傳統(tǒng)的硝酸纖維濾膜相比較，無紡布作為羊膜貼載物更具優(yōu)勢：其擁有良好韌性，經(jīng)折疊不易變型；保存時兩者可緊密貼合不分開；臨床使用時與羊膜易于辨別，在生理鹽水中復水較短時間即可將其兩者分開；形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)與傳統(tǒng)的硝酸纖維濾膜相比較，無紡布對

7、羊膜上皮細胞以及基質(zhì)形態(tài)無明顯影響。
　　 結(jié)論：
　　 1、就現(xiàn)行常用的滅菌方式抗菌素浸泡、過氧乙酸/乙醇混合液浸泡、γ-射線照射、碘伏浸泡而言，過氧乙酸/乙醇混合液浸泡對羊膜的損傷最小，值得進一步研究。
　　 2、相對于其他保存溫度而言，-20℃能較好的維持羊膜的形態(tài)，且該溫度是現(xiàn)有普通家用冰箱都達到的條件，故該法可大范圍推廣，特別是適用于經(jīng)濟不發(fā)達地區(qū)的應(yīng)用。
　　 3、無紡布作為羊膜貼載物比硝酸纖