完整以及去上皮羊膜移植術(shù)后眼表組織重塑型的研究.pdf

1、二十世紀(jì)四十年代，Rotth和Sorsby首次將羊膜移植應(yīng)用到眼表手術(shù)，證實(shí)了羊膜移植能夠治療眼表損傷，但由于缺乏對羊膜生理的深入認(rèn)識(shí)，羊膜在眼科的應(yīng)用沒有能夠普及。直到1995年，Kim和Tseng等再次將羊膜用于眼表化學(xué)傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)羊膜可以促進(jìn)兔的眼表上皮細(xì)胞貼附、生長以及分化成終末細(xì)胞并維持該細(xì)胞形態(tài)，減少上皮細(xì)胞凋亡。隨后大量的研究開始深入探討羊膜的作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)羊膜還具有降低炎癥反應(yīng)，減少瘢痕形成以及抑制新生血管等作

2、用。羊膜在眼科臨床的應(yīng)用得以迅速推廣和普及。
　　 目前，羊膜在眼科的應(yīng)用總體上有三類方法：第一類是將羊膜作為眼表面的一種敷料，貼附在受損的眼表面，以促進(jìn)眼表面損傷的修復(fù)；第二類是將羊膜作為眼表組織修復(fù)的移植替代物，用于受損的結(jié)膜或角膜區(qū)域，修復(fù)組織缺損，并提供損傷區(qū)周邊結(jié)膜或角膜上皮生長的微環(huán)境及支持物；第三類是將羊膜作為角膜或結(jié)膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的載體，用于構(gòu)建組織工程角膜或結(jié)膜上皮。
　　 在羊膜的保存及應(yīng)用過程中

3、，羊膜組織可以根據(jù)需要進(jìn)行一定處理，如脫水處理去除羊膜的上皮細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞的處理等。在上述第一、二類應(yīng)用中，一般使用完整的冷凍保存的羊膜組織，或脫水后室溫保存的羊膜組織。在第三類應(yīng)用中，有研究使用去上皮的羊膜(denuded amniotic membrane，dAM)，也有使用完整羊膜(intact amniotic membrane，iAM)。并有研究將dAM和iAM進(jìn)行了對比，發(fā)現(xiàn)角膜緣組織塊在iAM上進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)，構(gòu)建的組織工

4、程角膜上皮比在dAM上表現(xiàn)更好的基底膜形成和更低的角膜上皮分化狀態(tài)，但角膜上皮細(xì)胞在dAM上的遷移速度要比在iAM上快。到目前為止，還沒有研究探討這兩種形式的羊膜在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)治療效果的差異。
　　 本研究應(yīng)用新西蘭兔結(jié)膜缺損動(dòng)物模型，觀察iAM及dAM兩種羊膜在眼表重建手術(shù)中應(yīng)用后組織塑型的差異；并在臨床翼狀胬肉患者手術(shù)中分別進(jìn)行這兩種羊膜移植以修復(fù)結(jié)膜缺損，觀察這兩種羊膜移植術(shù)后結(jié)膜上皮的愈合情況。
　　 目的：比較完

5、整羊膜及去上皮羊膜在兔以及人結(jié)膜缺損修復(fù)術(shù)后結(jié)膜上皮的愈合以及手術(shù)局部的組織再塑型。
　　 方法：選取18只成年雄性新西蘭白兔，麻醉后剪除角膜緣顳上方5mm×5mm大小的結(jié)膜組織，隨后移植等大的羊膜組織，右眼移植完整羊膜(iAM)，左眼移植去上皮羊膜(dAM)。術(shù)后裂隙燈觀察手術(shù)區(qū)域的炎癥反應(yīng)，并通過熒光素鈉染色觀察兔結(jié)膜上皮愈合情況。術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)兔，取術(shù)區(qū)組織，免疫熒光染色檢測人羊膜組織基底膜成分Ⅶ型膠原，上皮角蛋白

6、K19及K12，纖維母細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA的表達(dá)情況，以及巨噬細(xì)胞浸潤情況；行PAS染色觀察杯狀細(xì)胞分化情況。在此基礎(chǔ)上，我們選擇病變程度相近的翼狀胬肉患者18只眼，隨機(jī)分為兩組，在實(shí)施翼狀胬肉切除后，行iAM或dAM移植，術(shù)后觀察結(jié)膜上皮愈合情況。
　　 結(jié)果：兔羊膜移植術(shù)后的熒光染色結(jié)果顯示，dAM移植組角膜緣以及結(jié)膜上皮修復(fù)的速度均明顯快于iAM移植組。H&E染色顯示，術(shù)后4天dAM組的角膜緣及結(jié)膜新生上皮出現(xiàn)明顯復(fù)層化，

7、而iAM組仍以單層上皮細(xì)胞為主。組織切片的PAS染色結(jié)果顯示，術(shù)后4天兩組術(shù)區(qū)結(jié)膜均未見杯狀細(xì)胞，在第5天時(shí)dAM組術(shù)區(qū)新生上皮開始出現(xiàn)杯狀細(xì)胞，術(shù)后兩周時(shí)全術(shù)區(qū)均存在杯狀細(xì)胞，其數(shù)量和形態(tài)與正常結(jié)膜組織相似；而iAM組的術(shù)區(qū)新生上皮中的杯狀細(xì)胞在術(shù)后第3周才開始出現(xiàn)，數(shù)量明顯低于其自身非術(shù)區(qū)正常結(jié)膜組織。
　　 免疫熒光染色結(jié)果顯示，術(shù)后5天內(nèi)，兩組植片中均見人羊膜組織基底膜vn型膠原陽性染色；術(shù)后2周時(shí)，dAM組術(shù)區(qū)組織中人

8、羊膜基底膜Ⅶ型膠原染色陰性，而iAM組仍見陽性染色，其形態(tài)呈波浪狀，位于上皮下的基質(zhì)層內(nèi)；術(shù)后3周仍有表達(dá)，但較2周時(shí)明顯減弱。巨噬細(xì)胞特異性抗體MAC387免疫熒光染色顯示，iAM組術(shù)后第5天時(shí)修復(fù)的上皮下基質(zhì)中開始出現(xiàn)巨噬細(xì)胞浸潤，并在2至3周內(nèi)逐漸增多；然而在dAM組，術(shù)后2周時(shí)修復(fù)的上皮下基質(zhì)中才出現(xiàn)MAC387陽性染色細(xì)胞，其數(shù)量在2周及3周時(shí)間點(diǎn)均明顯少于iAM組。α-SMA免疫熒光染色結(jié)果示，術(shù)后第2周時(shí)，iAM組術(shù)區(qū)基質(zhì)

9、開始出現(xiàn)α-SMA陽性細(xì)胞，術(shù)后3周時(shí)表達(dá)明顯增強(qiáng)，而dAM組術(shù)區(qū)的基質(zhì)在整個(gè)觀測時(shí)間范圍內(nèi)均未見α-SMA陽性表達(dá)。上皮細(xì)胞角蛋白K12和角蛋白K19的免疫熒光染色結(jié)果顯示兩組無明顯差異。
　　 翼狀胬肉切除聯(lián)合iAM或dAM移植術(shù)后，結(jié)膜熒光素染色結(jié)果顯示，行dAM移植者術(shù)區(qū)結(jié)膜上皮在7天內(nèi)完全愈合，而行iAM移植者術(shù)后結(jié)膜上皮愈合需要10至14天，兩組具有顯著性差異(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：相比較于完整羊膜，