人羊膜上皮細(xì)胞移植治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的移植免疫研究.pdf

1、目的：脊髓損傷的治療一直是醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn)，脊髓損傷后自身的修復(fù)能力非常有限，而死亡的神經(jīng)元不能由周圍神經(jīng)元代替且神經(jīng)元再生能力極弱，如何實(shí)現(xiàn)脊髓損傷后神經(jīng)再生與修復(fù)一直是該領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。脊髓損傷后留有嚴(yán)重的殘疾給患者帶來極大的痛苦，近年來，隨著干細(xì)胞研究的進(jìn)展，給患者帶來神經(jīng)功能重建的希望。隨著研究的進(jìn)展，各種干細(xì)胞陸續(xù)出現(xiàn)并取得一定的研究成果，同時，也發(fā)現(xiàn)不同細(xì)胞在移植治療脊髓損傷方面存在的各種局限性。比如，細(xì)胞移植后由于免疫排斥

2、反應(yīng)導(dǎo)致的一系列并發(fā)癥，或隨年齡老化而致干細(xì)胞含量及其增殖能力顯著降低，存在倫理問題，等等。本研究旨在通過對人羊膜上皮細(xì)胞與研究較多的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后移植免疫情況作對比，來揭示人羊膜上皮細(xì)胞移植治療創(chuàng)傷性脊髓損傷在移植免疫方面的優(yōu)勢。
　　方法：1、將人羊膜上皮細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)解凍，置于培養(yǎng)基中于37℃、5%CO2溫箱中培養(yǎng)。
　　2、將21只SD大鼠（體質(zhì)量250～300g，7周齡）顯微鏡下半橫斷脊髓建立動物

3、模型，脊髓橫斷后，立即將預(yù)先調(diào)適細(xì)胞密度的 HAECs、BMSC、PBS分別植入各分組大鼠的橫斷部位；設(shè)羊膜上皮細(xì)胞移植組、骨髓間充質(zhì)細(xì)胞移植組、PBS液對照組三組。
　　3、細(xì)胞植入后每3天進(jìn)行一次Basso Beattie Bresnahan運(yùn)動功能評分（BBB評分），評價后肢運(yùn)動功能恢復(fù)情況，持續(xù)2個月，根據(jù)BBB評分變化情況來觀察大鼠肢體功能恢復(fù)趨勢。
　　4、在細(xì)胞移植后一周和三個月，各組分別隨機(jī)選取2只大鼠，在損

4、傷部位手術(shù)切取損傷段脊髓，于4%多聚甲醛固定液中固定24 h后行石蠟包埋，利用免疫組織化學(xué)法標(biāo)記CD3+T細(xì)胞并在顯微鏡下觀察T細(xì)胞浸潤情況。選取CD3陽性細(xì)胞最多處，每張切片隨機(jī)選擇5個高倍視野（×400）下進(jìn)行陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)。
　　5、分別于細(xì)胞植入后1周、1個月、2個月、3個月時抽取靜脈血并分離血清。用ELISA法測定大鼠血清IL-2和IL-10 OD值，觀察二者變化情況。
　　結(jié)果：1、兩種細(xì)胞具有相似的生長周期與規(guī)律

5、。羊膜上皮細(xì)胞呈圓形或橢圓形，核大，胞質(zhì)中富有脂肪滴。
　　2、BBB評分顯示，三組大鼠在移植后三周內(nèi)均有較快恢復(fù)并在三周后進(jìn)入平臺期，細(xì)胞移植組恢復(fù)更明顯且羊膜上皮細(xì)胞組優(yōu)于骨髓間充質(zhì)細(xì)胞組（P<0.05）。
　　3、CD3免疫組化顯示各組切片在早期均有 CD3+細(xì)胞浸潤，移植后三個月羊膜上皮細(xì)胞組CD3+細(xì)胞浸潤明顯少于骨髓間充質(zhì)細(xì)胞組（P<0.05）。
　　4、羊膜上皮細(xì)胞組大鼠血清 IL-2的水平較骨髓間充質(zhì)細(xì)