人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠腦損傷.pdf

1、研究背景：腦損傷是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。目前對(duì)重度腦損傷導(dǎo)致的神經(jīng)功能缺失，治療難以達(dá)到滿意的效果。近年來(lái)干細(xì)胞研究的進(jìn)展給腦損傷的治療帶來(lái)了希望，取得了令人鼓舞的治療效果。干細(xì)胞移植治療腦損傷能夠改善宿主的神經(jīng)功能，可能的機(jī)制有：外源性干細(xì)胞在宿主體內(nèi)的內(nèi)分泌作用和機(jī)體自身神經(jīng)細(xì)胞的旁分泌作用，使局部的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子聚集，改善了神經(jīng)細(xì)胞的生存環(huán)境，使外源性干細(xì)胞更易向神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)化并與宿主的神經(jīng)細(xì)胞建立突觸聯(lián)系，具體的確切機(jī)制仍需進(jìn)

2、一步研究。目前移植干細(xì)胞治療腦損傷的途徑有腦損傷區(qū)原位移植、通過(guò)腦脊液循環(huán)及血液循環(huán)進(jìn)行移植，均能對(duì)神經(jīng)功能有所改善。采用何種移植途徑能最大程度改善宿主的神經(jīng)功能，尚沒(méi)有明確的結(jié)論。對(duì)各種移植途徑進(jìn)行治療效果系統(tǒng)比較的研究報(bào)道尚未見(jiàn)到，實(shí)驗(yàn)將給與探討，為干細(xì)胞移植治療腦損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。干細(xì)胞移植治療腦損傷的研究手段多是采用處死動(dòng)物后獲取組織標(biāo)本，進(jìn)行病理學(xué)的觀察。如何活體觀察外源性干細(xì)胞在宿主體內(nèi)的存活情況，是干細(xì)胞移植研究的難點(diǎn)和重

3、點(diǎn)。在小鼠胚胎干細(xì)胞移植治療大鼠腦損傷的研究方面，應(yīng)用1.5T核磁共振儀成功進(jìn)行了活體觀察，取得了滿意的觀察效果。在人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦損傷的研究方面，報(bào)道較少，有關(guān)活體示蹤羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在宿主體內(nèi)存活情況的研究也沒(méi)有見(jiàn)到報(bào)道。本文采用人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外標(biāo)記后移植治療腦損傷大鼠，3.0T核磁共振活體示蹤細(xì)胞的存活遷移情況。
　　 研究表明，神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)神經(jīng)元的生長(zhǎng)分化及功能的維持具有重要作用。神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)

4、干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化的研究已有多篇報(bào)道，聯(lián)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子與外源性干細(xì)胞移植治療腦損傷有人進(jìn)行了研究，對(duì)宿主神經(jīng)功能的改善有一定作用。在腦損傷區(qū)長(zhǎng)期維持神經(jīng)生長(zhǎng)因子的有效濃度，是神經(jīng)生長(zhǎng)因子聯(lián)合干細(xì)胞移植治療腦損傷的關(guān)鍵問(wèn)題，由于神經(jīng)生長(zhǎng)因子通過(guò)血腦屏障能力弱，外周血管給藥的途徑難以有效進(jìn)入腦損傷區(qū)，另外神經(jīng)生長(zhǎng)因子半衰期短，難以在腦損傷區(qū)長(zhǎng)久維持有效濃度，因此如何使神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)入腦損傷區(qū)并維持有效濃度仍需進(jìn)一步研究。本文采用量子點(diǎn)

5、觀察神經(jīng)生長(zhǎng)因子納米化后進(jìn)入羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的情況，通過(guò)羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞攜帶神經(jīng)生長(zhǎng)因子進(jìn)入腦損傷區(qū)，取得了滿意的效果。
　　 外源性干細(xì)胞移植入機(jī)體后，對(duì)宿主的影響目前尚無(wú)明確結(jié)論，仍需要研究人員進(jìn)行探討。本文通過(guò)采集血液檢測(cè)血常規(guī)及腫瘤標(biāo)志物，了解干細(xì)胞移植對(duì)腦損傷大鼠的影響，并通過(guò)核磁共振觀察有無(wú)新生物出現(xiàn)。
　　 綜合以上研究情況，我們將在人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦損傷的移植途徑、神經(jīng)生長(zhǎng)因子的給藥方法、羊膜間

6、充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦損傷對(duì)機(jī)體的影響及活體示蹤進(jìn)行探討，為腦損傷的臨床治療提供依據(jù)。
　　 結(jié)論：
　　 酶消化法能夠從人羊膜組織中分離提取出MSCs，經(jīng)bFGF和全反式維甲酸體外誘導(dǎo)，能夠分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，證實(shí)人羊膜MSCs具有多分化潛能。
　　 量子點(diǎn)神經(jīng)生長(zhǎng)因子納米顆粒（QDs-NGF-NPs）及菲力磁可以在體外成功標(biāo)記羊膜MSCs，濃度小于40μg/L的QOs-NGF-NPs及濃度小于30μg/ml的菲

7、力磁對(duì)羊膜MSCs的生長(zhǎng)分化沒(méi)有影響。
　　 腦損傷區(qū)移植羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞較尾靜脈及側(cè)腦室移植能更大程度改善大鼠的神經(jīng)功能。
　　 神經(jīng)生長(zhǎng)因子納米化顆粒能有效進(jìn)入羊膜MSCs，經(jīng)腦損傷區(qū)原位移植能有效改善腦損傷大鼠的神經(jīng)功能。
　　 羊膜MSCs經(jīng)菲立磁標(biāo)記移植大鼠后，能夠在腦損傷區(qū)存活分化，借助3.0T核磁共振儀能有效觀察到羊膜MSCs移植后的存活情況。
　　 經(jīng)QDs-NGF-NPs及菲力磁標(biāo)記的羊