聲帶細(xì)胞外基質(zhì)干預(yù)和人羊膜上皮細(xì)胞移植后聲帶瘢痕修復(fù)再生的研究.pdf

1、目的:應(yīng)用聲帶細(xì)胞外基質(zhì)干預(yù)（膠原酶和透明質(zhì)酸注射）和人羊膜上皮細(xì)胞(hAEC)在聲帶瘢痕內(nèi)的移植，觀測聲帶固有層及主要細(xì)胞外基質(zhì)變化的特點(diǎn)，探索其對聲帶瘢痕修復(fù)再生的作用。
　　方法:對20只新西蘭兔（40側(cè)聲帶）中的38側(cè)聲帶施行全身麻醉直接喉鏡下聲帶銳性損傷，形成聲帶瘢痕。分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用hAEC，慢病毒綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染作標(biāo)記。將hAEC移植入10側(cè)瘢痕聲帶，即hAEC移植組;聲帶細(xì)胞外基質(zhì)干預(yù)（注射膠原酶和透明質(zhì)酸）10

2、側(cè)瘢痕聲帶，即基質(zhì)干預(yù)組;hAEC移植同時細(xì)胞外基質(zhì)干預(yù)10側(cè)瘢痕聲帶，即復(fù)合組;瘢痕未處理8側(cè)聲帶，即瘢痕組。2側(cè)正常聲帶作為對照組。術(shù)后1個月、2個月時示蹤觀察hAEC在聲帶內(nèi)的生長、分布及活性情況;術(shù)后1、2、3、6個月采用HE染色、Masson染色及免疫組化染色觀察聲帶形態(tài)學(xué)變化及聲帶固有層膠原、纖維連接蛋白的分布及含量變化。
　　結(jié)果:hAEC原代培養(yǎng)4d后呈鋪路石樣生長，移植入瘢痕聲帶后可在固有層內(nèi)持續(xù)存活2個月;術(shù)后

3、1、2個月免疫熒光顯示角蛋白（上皮細(xì)胞標(biāo)志性蛋白）熒光陽性;術(shù)后6個月光鏡下觀察并半定量分析示:瘢痕組較正常組膠原量明顯增加、排列紊亂，hAEC移植組、基質(zhì)干預(yù)組及復(fù)合組膠原量和排列較瘢痕組改善，hAEC移植組、基質(zhì)干預(yù)組二者相似，復(fù)合組優(yōu)于前兩組，但均未及正常;免疫組化染色示瘢痕組較正常組纖維連接蛋白平均光密度明顯增加，hAEC移植組、基質(zhì)干預(yù)組及復(fù)合組纖維連接蛋白平均光密度介于瘢痕組和正常對照組之間，hAEC移植組與基質(zhì)干預(yù)組相差不