人羊膜上皮細(xì)胞的性質(zhì)研究.pdf

1、各類心臟疾病導(dǎo)致的心肌損傷和壞死,是目前世界各國的最主要死亡原因之一。即使在當(dāng)前介入治療、心臟手術(shù)和各類藥物治療等多種治療手段下,由心肌損傷和壞死所導(dǎo)致的心力衰竭的治療效果仍舊不甚理想。而以干細(xì)胞為基礎(chǔ)的細(xì)胞治療和組織工程有望修復(fù)損傷心肌,因此成為目前再生醫(yī)學(xué)研究中備受關(guān)注的熱點。而如何選擇一種最適合應(yīng)用于臨床細(xì)胞治療的種子細(xì)胞,是研究者們面對的首要問題和關(guān)鍵問題。人羊膜來源干細(xì)胞尤其是人羊膜上皮細(xì)胞表達(dá)多種胚胎干細(xì)胞的標(biāo)記物、具有較全

2、面的多分化潛能,并且因其具有“含量豐富、容易獲取、不引起倫理爭議、無致瘤性、免疫原性低、安全性高”等諸多胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞所不具備的優(yōu)勢和特點,有望成為未來再生醫(yī)學(xué)臨床應(yīng)用的重要種子細(xì)胞來源及最適合應(yīng)用于臨床細(xì)胞治療的種子細(xì)胞類型。
　　 實驗?zāi)康模?br>　　 1探索足月人羊膜上皮細(xì)胞和人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞類胚胎干細(xì)胞性質(zhì)差異。
　　 2探索足月人羊膜上皮層內(nèi)不同位置/層面上皮細(xì)胞的類胚胎干細(xì)胞性質(zhì)差異。

3、　　 實驗方法：
　　 1人羊膜全層制作石蠟切片,運用免疫組織化學(xué)染色法,測定人羊膜各層細(xì)胞對多種胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況；
　　 2分層消化人羊膜上皮細(xì)胞和人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞,對新鮮分離細(xì)胞,運用流式細(xì)胞學(xué)分析、免疫熒光法觀察測定其對多種胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況；
　　 3在人羊膜上皮層內(nèi),分階段消化其不同層面的上皮細(xì)胞,運用流式細(xì)胞學(xué)分析、免疫熒光法觀察測定其對多種胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況；

4、　　 4經(jīng)胰酶消化去上皮后的人羊膜組織,直接運用免疫組織化學(xué)染色法測定存留細(xì)胞上皮的特有屬性,同時制作石蠟切片,運用免疫組織化學(xué)染色法測定存留細(xì)胞對多種胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況。
　　 實驗結(jié)果：
　　 1人羊膜上皮層絕大部分是典型的單層立方上皮,但局部存在多層上皮細(xì)胞緊密排列而成的非單層結(jié)構(gòu)。
　　 2人羊膜上皮細(xì)胞表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81和多潛能細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因

5、子 Nanog、Oct4、Sox2的水平普遍高于人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞,但是人羊膜上皮細(xì)胞與人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞二者表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD73、CD105的水平無明顯差異。
　　 3人羊膜上皮近表層細(xì)胞表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81和多潛能細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Nanog、Oct4.、Sox2的水平均明顯低于人羊膜上皮近基底層細(xì)胞,尤其表達(dá)SSEA4最強最顯著的細(xì)胞在形態(tài)上主要為較小的近圓形細(xì)

6、胞而在位置分布上主要位于羊膜上皮近基底層處;人羊膜上皮近表層細(xì)胞與人羊膜上皮近基底層細(xì)胞二者表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記物CD73水平未見差異；但是人羊膜上皮近表層細(xì)胞表達(dá)SSEA1和CK19的水平明顯高于人羊膜上皮近基底層細(xì)胞。
　　 4經(jīng)胰酶反復(fù)多次消化去上皮后的羊膜組織,其上皮面仍有細(xì)胞存留,這些細(xì)胞具有上皮屬性,并且比人羊膜全層未消時的上皮細(xì)胞更加強烈的表達(dá)胚胎干細(xì)胞標(biāo)記物SSEA3、SSEA4、TRA1-60、TRA1-81。

7、
　　 實驗結(jié)論：
　　 1人羊膜上皮層不是均一的單層上皮,人羊膜上皮內(nèi)存在多層上皮細(xì)胞緊密排列而成的非單層結(jié)構(gòu)。
　　 2人羊膜上皮細(xì)胞比人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞具有更接近胚胎干細(xì)胞的性質(zhì)。
　　 3人羊膜上皮層內(nèi)尤其是上皮復(fù)層區(qū)域內(nèi)的上皮細(xì)胞具有異質(zhì)性,人羊膜上皮近基底層細(xì)胞比人羊膜上皮近表層細(xì)胞具有更強的類胚胎干細(xì)胞性質(zhì),這種異質(zhì)性和干性差異可能源于人羊膜上皮中含有處于不同分化發(fā)育階段的上皮細(xì)胞。胚胎干