人羊膜上皮細(xì)胞水通道蛋白8的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.pdf

1、第一部分 Forskolin對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞WISH株水通道蛋白-8表達(dá)及分布的影響 目的：研究Forskolin對(duì)人羊膜上皮細(xì)胞WISH株AQP8mRNA和蛋白表達(dá)及分布的影響。 方法：將培養(yǎng)的人羊膜上皮細(xì)胞WISH株隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組以正常培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組分為不同濃度Forskolin處理組和不同時(shí)間Forskolin處理組。不同濃度Forskolin處理組，分別以5、10、20、40、1.

2、00、200pmol幾Forskolin，孵育WISH細(xì)胞24h，采用Westernblot技術(shù)檢測(cè)WISH株AQP8蛋白的表達(dá)水平。不同時(shí)間Forskolin處理組，以Forskolin(100gmol/L)分別培養(yǎng)4h、8h、16h、24h、48h，RT-PCR、Westernblot技術(shù)檢測(cè)WISH株AQP8mRNA和蛋白的表達(dá)水平。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)人羊膜上皮細(xì)胞WISH株AQP8蛋白的分布。 結(jié)果：(1)不同濃度

3、Forskolin處理組，F(xiàn)orskolin10μmol～100μmo1/L之間WISH細(xì)胞AQP8蛋白的表達(dá)水平呈劑量依賴(lài)性增加，在100μmol/L時(shí)達(dá)到峰值。(2)不同時(shí)間Forskolin處理組，各時(shí)間處理組AQP8mRNA和蛋白的表達(dá)水平均高于對(duì)照組水平(P<0．05)，AQP8mRNA的表達(dá)水平在l6h處理組達(dá)峰值，AQP8蛋白表達(dá)水平在24h處理組達(dá)峰值。(3)免疫熒光顯示Forskolin處理組細(xì)胞膜上的熒光明顯增強(qiáng)，細(xì)

4、胞內(nèi)的熒光明顯減弱。 結(jié)論：Forskolin增加人羊膜上皮細(xì)胞WISH株AQP8mRNA及蛋白表達(dá)水平，促使細(xì)胞內(nèi)AQP8向細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移，使細(xì)胞膜上AQP8蛋白的分布增加。 第二部分人羊膜上上皮細(xì)胞WISH株AQP8信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究 目的：通過(guò)研究ACT-D、Cycloheximide和H-89對(duì)cAMP誘導(dǎo)的AQP8mRNA和蛋白表達(dá)效應(yīng)的影響，探討人羊膜上皮細(xì)胞WISH株AQP8的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

5、方法：將培養(yǎng)的人羊膜上皮細(xì)胞WISH株隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組以正常培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組分為cAMP處理組、ACT-D處理組、H-89處理組、Cycloheximide處理組、ACT-D+cAMP處理組、H-89+cAMP處理組、Cycloheximide+cAMP處理組，采用RT-PCR、Westernblot方法檢測(cè)WISH細(xì)胞AQP8mRNA和蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：cAMP明顯增加WISH細(xì)胞AQP8mRNA和蛋白

6、表達(dá)水平。ACT-D+cAMP處理組，WISH株細(xì)胞AQP8mRNA的表達(dá)水平低于cAMP處理組，高于ACT-D處理組，差異均有顯著性(P<0．05)。H-89+cAMP處理組，AQP8mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于cml'vIP處理組，高于H-89處理組，差異有顯著性(P<0．05)。Cycloheximide+cAMP處理組，AQP8mRNA和蛋白的表達(dá)水平明顯低于cAMP處理組，差異有顯著性(P<0．05)。 結(jié)論：AC