ERK1-2和PI3-K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在CTGF誘導(dǎo)人近端小管上皮細(xì)胞ILK表達(dá)中的作用研究.pdf

1、目的：腎小管間質(zhì)纖維化(TIF)是各種腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎病(ESRD)的共同通路。肌成纖維細(xì)胞是其主要的效應(yīng)細(xì)胞，它主要通過上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)變(EMT)而來(lái)。結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)作為許多致纖維化因子如TGF-β1、糖基化終產(chǎn)物(AGEs)及血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)等的關(guān)鍵下游介質(zhì)，越來(lái)越引起研究者的關(guān)注。既往的研究發(fā)現(xiàn)，CTGF引起腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT而在小管間質(zhì)纖維化形成中起十分重要的作用，然而其復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑仍

2、未闡明。整合素連接激酶(ILK)，是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與多種信號(hào)傳導(dǎo)通路，與EMT及腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)初步探討CTGF對(duì)人腎近端小管上皮細(xì)胞(HPTC)ILK表達(dá)的影響及其與細(xì)胞內(nèi)MAPK、P13-K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)系。 方法：人近端腎小管上皮細(xì)胞株(HPTCL)HK-2細(xì)胞用含10％胎牛血清(FCS)的低糖型Dulbecco’S Modified Eagle’S Medium(DMEM)培養(yǎng)液培養(yǎng)，

3、待細(xì)胞生長(zhǎng)至80％-85％融合時(shí)，改用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液靜置24h，將細(xì)胞同步靜止于GO期。CTGF(終濃度為50ng/ml)作用無(wú)血清同步化的HPTC不同時(shí)間(0、6、24、48、72)小時(shí)后和不同濃度CTGF(終濃度分別為0、1、5、20、50ng/ml)作用于HPTC 24h后，采用Western印跡技術(shù)檢測(cè)ILK蛋白表達(dá)。在無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液中加入CTGF(50ng/ml)45min前，分別加入MEK抑制劑PD98059(10p

4、.mol/L)、P13-K抑制劑LY294002(5gmol/L)和P38 MAPK抑制劑SB203580(10gmol/L)，12h后(Real.time PCR)及24h后(Western Blotting)分別檢測(cè)ILK mRNA和protein的表達(dá)。 結(jié)論： 1.在基礎(chǔ)狀態(tài)下，人近端腎小管上皮細(xì)胞有少量ILK蛋白表達(dá)。 2.CTGF呈時(shí)間及濃度依賴性誘導(dǎo)人近端腎小管上皮細(xì)胞ILK蛋白表達(dá)。 3.