水通道蛋白-1mRNA在人晶狀體上皮細胞中的表達.pdf

1、目的：水通道蛋白1(aquaporin1，AQP1)參與水跨膜轉運及水平衡調節(jié)，廣泛分布在機體與液體吸收和分泌有關的上皮細胞中，及可能協(xié)同水跨細胞轉運的內皮細胞中。AQP1存在于前囊下晶狀體上皮細胞，它的功能或表達水平變化直接關系到晶狀體代謝的異常。本研究用半定量RT-PCR法結合計算機成像分析系統(tǒng)檢測人晶狀體前囊膜下晶狀體上皮細胞AQP1mRNA的表達，并比較透明晶狀體和老年性白內障患者晶狀體上皮細胞AQP1mRNA表達的差異，以及人

2、晶狀體上皮細胞系HLE-B3和老年性白內障患者晶狀體上皮細胞AQP1mRNA表達的差異，為進一步研究老年性白內障成因、防治提供新的線索。 實驗材料與方法 一、實驗材料 1、標本來源透明晶狀體前囊膜9例9只眼。老年性白內障患者晶狀體前囊膜31例31只眼(其中皮質性白內障14例，核性白內障17例)。晶狀體上皮細胞系為人晶狀體上皮細胞系HLE-B3。標本保存于-70℃冰箱。 2、實驗儀器：PCR擴增儀、凝膠電泳

3、成像儀、紫外分光光度儀，微型離心機。 3、實驗試劑：動物RNAout，RT-PCR試劑盒，特異性引物由北京三博遠志生物技術有限公司合成，耐熱DNA聚合酶(Taq酶，濃度為5U/μl)及Marker(DNA分子量標準DL2000)。 二、實驗方法 1、樣本總RNA的提取：使用RNAout，按說明書操作。 2、反轉錄反應 3、PCR反應 4、結果觀察：反應結束后，取PCR產物5μl于2％瓊脂糖

4、凝膠電泳，成像儀觀察結果并攝像，存入成像分析系統(tǒng)。 三、統(tǒng)計學分析采用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件進行方差分析，P<0.05為有統(tǒng)計學意義。 實驗結果 RT-PCR擴增產物，可見有一與140bp相一致的擴增片段，為標志人AQP<,1>mRNA的表達產物。皮質性白內障患者晶狀體前囊膜和透明晶狀體前囊膜AQP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。核性白內障患者晶狀體前囊膜和透明晶狀體前囊膜．AQP

5、<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。皮質性白內障患者晶狀體前囊膜和核性白內障患者晶狀體前囊膜AQP<,1>mRNA表達差異無顯著性(方差分析P>0.05)。皮質性白內障患者晶狀體前囊膜和HLE-B3細胞系AQP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。核性白內障患者晶狀體前囊膜和HLE-B3細胞系AQP<,1>mRNA表達差異有顯著性(方差分析P<0.01)。 結論 AQP<,1>m